FPLC болон HPLC-ийн гол ялгаа нь FPLC нь уураг, нуклеотид, пептид зэрэг том биомолекулуудыг цэвэршүүлдэг шингэн хроматографийн төрөл бөгөөд HPLC нь жижиг молекул жинтэй нэгдлүүдийг ялгадаг шингэн хроматографийн төрөл юм.
Шингэн хроматографи нь дээжийг тус тусад нь салгахад ашигладаг техник юм. Энэ тусгаарлалт нь тодорхой дээжийн хөдөлгөөнт болон суурин фазуудтай харилцан үйлчлэлийн улмаас үүсдэг. Шингэн хроматографийн хөдөлгөөнт фазын хамаарал дээр үндэслэн дээжийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг тусгаарладаг. Хөдөлгөөнт фаз ба дээж нь багана дамжин өнгөрөхөд дээжийн бүрэлдэхүүн хэсгүүд нь хэт ягаан туяаны-VIS спектроскопоор илрүүлж болох зурваст хуваагдаж эхэлдэг. Тиймээс FPLC болон HPLC нь хоёр төрлийн шингэн хроматографийн арга юм.
FPLC гэж юу вэ?
FPLC нь уураг, нуклеотид, пептид зэрэг том биомолекулуудыг цэвэршүүлдэг шингэн хроматографийн нэг төрөл юм. Түргэн уургийн шингэн хроматографийг (FPLC) анх 1982 онд Pharmacia компани Швед улсад боловсруулж, зах зээлд гаргасан. Энэ нь ихэвчлэн уургийн хольцыг шинжлэх эсвэл цэвэршүүлэхэд ашиглагддаг. Энэ нь хөдөлж буй шингэн (хөдөлгөөнт фаз) ба сүвэрхэг хатуу материал (хөдөлгөөнгүй фаз) -ын дээжийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн хамаарлын зарчим дээр суурилдаг. FPLC-д хөдөлгөөнт фаз нь буфер, суурин үе нь бөмбөлгүүдийгээс бүрдсэн давирхай юм. Энэ нь ихэвчлэн цилиндр шилэн эсвэл хуванцар баганад савлагдсан хөндлөн холбоос бүхий агарозоос бүрддэг.
Зураг 01: FLPC (хурдан уургийн шингэн хроматографи) аппарат
FLPC-ийн ихэнх стратегид ион солилцооны давирхайг ашигладаг. Тиймээс сонирхож буй уураг нь цэнэгийн харилцан үйлчлэлээр давирхайтай холбогдоно. FLPC техник нь мөн хоёр буфер ашигладаг: буфер 1 (ажиллаж буй буфер) ба буфер 2 (зайлуулах буфер). Эхэндээ буфер болон дээжийн хольцыг баганын дундуур урсгах үед хольц дахь уураг нь цэнэгийн харилцан үйлчлэлээр давирхайтай холбогдоно. Гэвч процессын төгсгөлд элюцийн буфер баганаар дамжих үед сонирхож буй уураг нь салж, элюцийн буфер дэх уусмал руу буцаж ирдэг. Дараа нь уусмал (сонирхолтой уураг агуулсан шүүрүүлэгч) давсны концентраци болон уургийн концентрацийг хэмждэг хоёр детектороор дамждаг. Уураг тус бүрийг ялгаруулж байх үед илрүүлэлтийн явцад "оргил" болж харагдах ба цаашид ашиглах зорилгоор цуглуулж болно.
HPLC гэж юу вэ?
HPLC нь жижиг молекул жинтэй нэгдлүүдийг ялгадаг шингэн хроматографийн төрөл юм. 1969 онд анхны HPLC-ийг АНУ-ын Уотерс Корпораци үйлдвэрлэжээ. Өндөр хүчин чадалтай шингэний хроматографид (HPLC) уусгагч (хөдөлгөөнт фаз) дахь дээжийн хольцыг (шинжлэх бодис) өндөр даралтын дор хроматографийн савлагааны материал (хөдөлгөөнгүй үе) бүхий баганаар шахдаг. Дээжний хольцыг гелий эсвэл азотын хөдөлгөөнт хийн урсгалаар дамжуулдаг.
Зураг 02: HPLC (Өндөр гүйцэтгэлтэй шингэний хроматографи)
Хөдөлгөөнгүй фазтай хамгийн бага харилцан үйлчлэлтэй эсвэл хөдөлгөөнт фазтай хамгийн их харилцан үйлчилдэг дээжийн хольц дахь бүрэлдэхүүн хэсгүүд нь баганаас хурдан гарах болно. Нөгөөтэйгүүр, суурин фазтай хамгийн их харилцан үйлчлэлтэй эсвэл хөдөлгөөнт фазтай хамгийн бага харилцан үйлчлэлтэй байдаг дээжийн хольц дахь бүрэлдэхүүн хэсгүүд нь баганаас удаан гарах болно. Дээрх харилцан үйлчлэлийн зарчимд үндэслэн дээжийн хольцын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг салгаж болно. Түүнчлэн, багажийн илрүүлэгч нь баганаас гарах дээжийн хольцын бүрэлдэхүүн хэсэг бүрийг тодорхойлдог. HPLC нь хүрээлэн буй орчин, биологийн дээжийг эм, хорт бодис, пестицид гэх мэт мэдэгдэж байгаа нэгдлүүд байгаа эсэхийг шалгахад ашигладаг. Үүнийг эм зүй, байгаль орчин, шүүх эмнэлэг, химийн бодис зэрэг янз бүрийн салбарт ашигладаг.
FPLC болон HPLC хоёрын ижил төстэй талууд юу вэ?
- FPLC болон HPLC нь шингэн хроматографийн төрөл юм.
- Хоёуланг нь биологийн дээжийг ялгах, тодорхойлоход ашигладаг.
- Тэд шингэн хөдөлгөөнт фаз ба хатуу суурин фазтай.
- Хоёр арга техник нь дээжээр дамжихын тулд багана ашигладаг.
- Эдгээр техник нь сорьц ялгах, илрүүлэхэд насос, илрүүлэгч, хавхлага болон программ хангамжийг ашигладаг.
FPLC болон HPLC хоёрын ялгаа юу вэ?
FPLC нь уураг, нуклеотид, пептид зэрэг том биомолекулуудыг цэвэрлэхэд ашигладаг шингэн хроматографийн нэг төрөл юм. HPLC нь жижиг молекул жинтэй нэгдлүүдийг ялгахад ашигладаг шингэн хроматографийн нэг төрөл юм. Энэ бол FPLC ба HPLC хоёрын гол ялгаа юм. Түүнчлэн, FPLC нь рН ба дамжуулагчийн хяналт, фракц цуглуулагчийг ашигладаг. Үүний эсрэгээр, HPLC нь рН болон дамжуулалтын хяналт болон фракц цуглуулагч ашигладаггүй.
Доорх инфографик нь FPLC болон HPLC-ийн ялгааг хүснэгт хэлбэрээр жагсаасан болно.
Хураангуй – FPLC ба HPLC
Хроматографи нь хольцоос бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг ялгахад ашигладаг лабораторийн аналитик арга юм. Энэ нь баганын хроматографи, хийн хроматографи, шингэн хроматографи, ион солилцооны хроматографи гэх мэт хэд хэдэн төрөлд хуваагддаг. FPLC болон HPLC нь хоёр төрлийн шингэн хроматографийн арга юм. FPLC нь уураг, нуклеотид, пептид зэрэг том биомолекулуудыг цэвэрлэхэд ашигладаг шингэн хроматографийн нэг төрөл юм. Нөгөө талаас, HPLC нь жижиг молекул жинтэй нэгдлүүдийг ялгахад ашигладаг шингэн хроматографийн нэг төрөл юм. Тиймээс, энэ нь FPLC болон HPLC хоёрын ялгаа юу болох талаар хураангуй юм.
