Үндсэн ялгаа – Халуун ба Хүйтэн трипсинзаци
Халуун ба Хүйтэн трипсинизаци нь амьтны эсийг өсгөвөрлөхөд эсийг ферментийн задралд ашигладаг хоёр арга юм. Нэрнээс нь харахад дулаан ба хүйтэн трипсинзацийн гол ялгаа нь эсийн задралд зориулж трипсин нэмсэн температураас хамаарна. Халуун трипсинизаци нь өндөр температурын нөхцөлд (36.5 – 37 0C) явагддаг бол хүйтэн трипсинизаци нь бага температурт явагддаг.
Амьтны эсийн анхдагч эсийг өсгөвөрлөх явцад гурван үндсэн аргыг ашигладаг бөгөөд амжилттай болох нь батлагдсан. Гурван аргад эсийг механик задлах, ферментийн задрал, анхдагч эксплант хийх арга орно. Эсийн ферментийн задрал нь эсийг тусгаарлахад хүргэдэг бөгөөд энэ нь уураг задалдаг фермент трипсинээр хийгддэг. Тиймээс энэ үйл явцыг трипсинзаци гэж нэрлэдэг. Дулаан трипсизаци ба Хүйтэн трипсизаци гэсэн хоёр өөр нөхцөлд трипсизаци хийх боломжтой. Халуун трипсинизаци нь 36.5 – 37 0C температурт дулаан нөхцөлд эсийг трипсинээр эмчлэх арга юм. Хүйтэн трипсинизаци нь маш бага температуртай мөсөнд илүү хүйтэн нөхцөлд явагддаг трипсин боловсруулах үйл явц юм.
Халуун трипсинзаци гэж юу вэ?
Анхдагч эсийн өсгөвөр үүсгэхийн тулд эсийг тусгаарлахын тулд эсийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг задлахын тулд трипсинжуулалт хийж болно. Трипсин нь уургийн задралын фермент бөгөөд трипсинжуулалтад ашигладаг ферментийн хольц нь түүхий ханд эсвэл цэвэршүүлсэн бүтээгдэхүүн байж болно. Түүхий ханд нь бусад задралын ферментүүдийг агуулдаг тул уураг задрах, эсийн задралд илүү үр дүнтэй гэж үздэг.
Халуун трипсинизаци нь өндөр температурын нөхцөлд явагддаг эсийг задлахад хамгийн түгээмэл хэрэглэгддэг ферментийн арга юм. Трипсинизаци хийхээс өмнө хүссэн эдийг жижиг хэсгүүдэд хуваана. Энэ нь амархан задлах үйл явцыг хөнгөвчилдөг. Дараа нь жижиглэсэн эдийг задлах суурь давсны орчин гэж нэрлэгддэг тусгай хэрэгсэлд угаана.
Угаах үе шат дууссаны дараа эсүүд идэвхтэй фермент болох трипсин агуулсан колбонд хувирна. Энэ техник нь дулаан трипсинжуулалтын протоколыг хэлдэг тул трипсиныг ойролцоогоор 37 0C-ийн температурт дөрвөн цагийн турш байрлуулна.
Зураг 01: Трипсин
Протоколыг хялбар болгох, задлах процессыг хурдасгахын тулд центрифугийн аргыг ашиглан агуулгыг хольж хутгана. Санал болгож буй хугацаа дууссаны дараа эсийг дээд давхаргаас гаргаж авах боломжтой. Супернатантаас гаргаж авсан эсүүдийг дараа нь тодорхой температур, цагт өсгөвөрлөнө.
Хүйтэн трипсинзаци гэж юу вэ?
Хүйтэн трипсинизаци нь хүйтэн нөхцөлд явагддаг өөр нэг төрлийн трипсинизаци юм. Энэ техникээр жижиглэсэн, угаасан эсийг мөсөн дээр шилэн саванд хийж, дараа нь трипсинээр дэвтээнэ. Угаах хугацаа хамаагүй урт байдаг – ойролцоогоор 6 – 24 цаг.
Дэвтээж дууссаны дараа трипсиныг эсийн лизатаас салгаж, эдийн хэсгүүдийг 37 0C температурт 20-30 минутын турш өсгөвөрлөнө. Эд эсийг задлах нь эд эсийн хольцыг олон удаа соруулснаар үүсдэг. Энэ нь эсүүд мембранаас салж, дээд давхаргад ирэх боломжийг олгоно. Эсүүд дээд давхаргад орсны дараа тэдгээрийг өсгөвөрлөж, хүссэн температур, хугацаанд нь ургуулдаг.
Хүйтэн трипсинжуулалтын арга нь хэд хэдэн давуу талтай
- Эс гэмтэх нь багассанаар амьдрах чадвартай эсийн гарц өндөр. Центрифуг хийхгүйгээр эсийн гэмтлийг багасгадаг.
- Маш тохиромжтой арга.
- Хөдөлмөр багатай.
Хүйтэн трипсинжуулалтын аргын гол хязгаарлалт нь нэг удаад их хэмжээгээр хэрэглэх боломжгүй юм.
Дулаан болон хүйтэн трипсинацын хооронд ямар төстэй зүйл байдаг вэ?
- Дулаан болон хүйтэн трипсинзацийн процессууд нь эсийг задлахад трипсин ферментийг ашигладаг.
- Дулаан болон хүйтэн трипсинзацийн процессыг эсийг задлах зорилгоор эсийн өсгөвөрлөх процедурт ашигладаг.
- Дулаан болон хүйтэн трипсинзацийн эмчилгээний процедурын аль алинд нь эсүүд нь дээд давхаргаас гаралтай.
Дулаан ба хүйтэн трипсинзаци юугаараа ялгаатай вэ?
Дулаан ба Хүйтэн трипсинзаци |
|
| Халуун трипсинизаци нь 36.5 – 37 хэмийн дулаан нөхцөлд эсийг трипсинээр эмчлэх арга юм 0. | Хүйтэн трипсинизаци нь маш бага температуртай мөсөнд илүү хүйтэн нөхцөлд явагддаг трипсин боловсруулах үйл явц юм. |
| Протокол | |
| Хэрчсэн салфеткауудыг процедурын туршид 37 0C температурт тогтмол байлгана. | Жижиглэсэн салфетка хэсгүүдийг эхлээд мөс шиг хүйтэн температурт хадгалж, дараа нь 37 0 хэмд хадгална. |
| Температур | |
| Халуун трипсинизаци 36.5 – 37-д тохиолддог 0 | Хүйтэн трипсинизаци нь мөсний хүйтэн температурт явагддаг. |
| Хэрэглэсэн хугацаа | |
| Халуун трипсинжуулалтын бүх үйл явцад (ойролцоогоор 4 цаг) бага хугацаа шаардагдана. | Хүйтэн трипсинжуулалт хийхэд илүү урт хугацаа шаардлагатай (ойролцоогоор 6-24 цаг). |
| Амьдрах чадвартай эсийн гарц | |
| Дулаан трипсинац багатай. | Хүйтэн трипсинжуулалт ихтэй. |
| Центрифугийн хэрэглээ | |
| Бүлээн трипсинжуулалтад эсийг задлахад центрифуг хийх шаардлагатай. | Хүйтэн трипсинжуулалтад центрифуг хийх шаардлагагүй. |
| Трипсинзаци хийх эхний эдийн хэмжээ | |
| Илүү их хэмжээний эдийг бүлээн трипсинжуулалтад ашиглаж болно. | Бага хэмжээний эдийг хүйтэн трипсинжуулалтад ашиглаж болно. |
| Эсийн гэмтэл | |
| Дулаан трипсинжуулалтын центрифугийн улмаас өндөр. | Хүйтэн трипсинжуулалтын улмаас бага. |
Хураангуй – Дулаан ба Хүйтэн трипсизаци
Трипсинзаци гэдэг нь эсийг өсгөвөрлөх явцад анхдагч эсийн өсгөврийг задлах, бэлтгэхэд уураг задалдаг фермент трипсиныг ашиглах арга юм. Процедурын явцад ашигласан температурт үндэслэн трипсинизаци хийх хоёр үндсэн арга байдаг. Эдгээр нь дулаан, хүйтэн трипсинизаци юм. Халуун трипсинжуулалтыг 37 0C температурт, харин хүйтэн трипсинжуулалтыг мөсөн хүйтэн нөхцөлд хийдэг. Хэдийгээр хүйтэн трипсинизаци нь дуусахад удаан хугацаа шаардагддаг ч амьдрах чадвартай эсийн гарц өндөр байдаг гэж үздэг. Энэ нь хүйтэн трипсинжуулалтад хүчтэй центрифугийн алхамуудыг ашигладаггүй тул эсийн гэмтэл хамгийн бага байдагтай холбоотой юм. Энэ бол дулаан, хүйтэн трипсинзацийн ялгаа юм.
