Гель шүүлтүүр ба ойрын хроматографийн гол ялгаа нь гель шүүлтүүрийн хроматографи нь анализаторын дээжийн молекул жин эсвэл хэмжээ зэргээс хамаардаг бол ойрын хроматографи нь шинжлүүлэгчийн хөдөлгөөнгүй лигандтай ойр дотно байдлаас хамаардагт оршино.
Аналитик хими дэх хроматографи гэдэг нэр томьёо нь холимог дахь бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг өөр өөр техник ашиглан салгах үйл явцыг хэлнэ. Хроматографи нь салгах янз бүрийн аргыг төлөөлдөг хамтын нэр юм.
Гель шүүлтүүрийн хроматографи гэж юу вэ?
Гель шүүлтүүрийн хроматографи нь бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг салгах нь молекулын жин эсвэл хэмжээний ялгаанаас хамаардаг аналитик арга юм. Энэ аргыг мөн хэмжээ хассан хроматографи эсвэл молекул шигшүүр хроматографи гэж нэрлэдэг. Энэ процесс дахь ялгах арга нь дээж дэх молекулуудын гель шүүлтүүрийн орчны нүхэнд орох чадвараас хамаарна.
Гель шүүлтүүрийн техникт суурин фаз нь нарийхан хэмжээтэй молекулын хэмжээтэй нүхтэй, чийгшүүлсэн хөвөн хэлбэртэй материалын ирмэгийг агуулдаг. Хэрэв бид янз бүрийн хэмжээтэй молекулуудаас бүрдэх усан уусмалыг эдгээр "молекул шигшүүр" агуулсан баганаар дамжуулбал шүүх орчны нүхнээс том молекулууд баганын дундуур хурдан хөдөлдөг. Үүний эсрэгээр, жижиг молекулууд нь гельний нүхэнд орж, баганын дундуур аажмаар шилжих хандлагатай байдаг. Молекулууд молекулын хэмжээг багасгах дарааллаар баганаас ялгардаг. Энд гелийн үл хамаарах хязгаар нь өгөгдсөн гелийн нүхийг нэвтлэх чадваргүй хамгийн жижиг молекулуудын молекулын масс юм.
Шууд бус гель шүүлтүүрийн арга, тогтворжсон гель шүүлтүүр, гель ирмэгийн диализ гэх мэт янз бүрийн төрлийн гель шүүх арга байдаг. Шууд бус гель шүүлтүүрийн хроматографи нь бамбай булчирхайн чөлөөт гормоныг тодорхойлоход тустай. Тогтвортой төлөвт гель шүүлтүүрийн хроматографи нь кортизол, тестостерон гэх мэт чөлөөт стероидуудыг хэмжихэд тустай шууд бус арга юм. Нөгөө талаас гель диализ нь тогтвортой төлөвт гель шүүлтүүрийн өөрчлөлт бөгөөд харьцангуй хялбар байдаг.
Афинитын хроматографи гэж юу вэ?
Афинитын хроматографи нь хөдөлгөөнгүй лиганд болон түүний холбогч түншийн хоорондох тусгай холболтын харилцан үйлчлэлээс хамаардаг аналитик арга бөгөөд салгах арга юм. Зарим жишээнд эсрэгбие-эсрэгтөрөгчийг холбох, фермент-субстрат холбох, фермент-дарангуйлагч холбох зэрэг орно. Тиймээс энэ техник нь нуклейн хүчлийг цэвэршүүлэх, эсийн ханднаас уураг цэвэршүүлэх, цусыг цэвэрлэх зэрэгт олон чухал хэрэглээтэй.
Энэ техникт хамгийн чухал шинж чанар нь лигандыг хөдөлгөөнгүй болгох явдал юм. Үүний тулд бид акрилат, цахиурын гель гэх мэт янз бүрийн материалыг ашиглаж болно. Зорилтот молекулын лиганд руу стерик хөндлөнгийн оролцооноос урьдчилан сэргийлэх нь чухал юм. Түүнээс гадна хатуу фаз дээр дарангуйлагч бэхлэгдсэн байдаг. Бид энэ дарангуйлагчийг spacer гэж нэрлэдэг. Сонгодог байдлаар, зай баригч нь нүүрсустөрөгчийн гинжээс тогтдог.
Ойролцоо хроматографийн суурин үе шат нь цөм, зай үүсгэгч, лигандыг агуулдаг. Заримдаа энэ нь лигандтай холбогдсон металлын ионтой байдаг. Энэ техник дэх суурин фазын хамгийн тохиромжтой хатуу фаз бол агароз гель юм, учир нь энэ нь ямар ч хэмжээтэй давирхайн давхаргатай баганыг дүүргэж, савлахад хялбар бөгөөд биомолекулууд нь бөмбөлгүүдийг дотор болон дундуур чөлөөтэй урсах хангалттай том байдаг. Лигандууд нь ирмэгийн полимерт янз бүрийн аргаар ковалент байдлаар холбогдож чаддаг. Хамгийн түгээмэл spacer нэгдлүүд нь цианоген бромид, эпоксид, С6 хүчилтэй эпоксид, диамин юм. Нөгөөтэйгүүр, бидний хэрэглэж болох лиганд нь зорилтоос хамааран өөр өөр байдаг, жишээлбэл, эсрэгбие-эсрэгтөрөгч, төмөр эсвэл хөнгөн цагаан ион-фосфопротейн, авидин-биотин, глутатион-GST, хелатор-Түүний шошготой уураг гэх мэт.
Гель шүүлтүүр ба холбогдох хроматографийн хооронд ямар ялгаа байдаг вэ?
Хроматографи нь шинжилгээний чухал арга юм. Гель шүүлтүүрийн хроматографи ба ойрын хроматографи нь хроматографийн хоёр чухал хувилбар юм. Гель шүүлтүүр ба ойрын хроматографийн гол ялгаа нь гель шүүлтүүрийн хроматографи нь молекулын жин эсвэл шинжилгээний дээжийн хэмжээ зэргээс хамаардаг бол ойрын хроматографи нь шинжлэгдэх бодисын хөдөлгөөнгүй лигандтай харьцах харьцаанаас хамаардаг.
Хураангуй – Гель шүүлтүүр ба Хольцын хроматографи
Хроматографийн арга нь хэрэглээ болон аналитын дээжийн шинж чанараас хамааран өөр өөр төрөл байдаг. Гель шүүлтүүр ба ойрын хроматографи нь ийм хоёр төрлийн техник юм. Гель шүүлтүүр ба ойрын хроматографийн гол ялгаа нь гель шүүлтүүрийн хроматографи нь молекулын жин эсвэл шинжилгээний дээжийн хэмжээ зэргээс хамаардаг бол ойрын хроматографи нь шинжлүүлэгчийн хөдөлгөөнгүй лигандтай холбоотой байхаас хамаардаг.
