Үндсэн ялгаа – Овоолсон гель ба тусгаарлах гель
SDS-PAGE техникийг тайлбарлахад овоолох гель болон ялгах гель гэсэн нэр томъёог ашигладаг. SDS-PAGE буюу натрийн додецил сульфат-полиакриламидын гель электрофорез нь уургийн молекулуудыг молекулын жинд үндэслэн ялгахад ашигладаг лабораторийн арга юм. Техникийн цаадах онол нь өөр өөр молекул жинтэй уургууд нь өөр өөр шилжилт хөдөлгөөнийг харуулдаг; Бага молекул жинтэй молекулууд илүү хурдан нүүж, өндөр молекул жинтэй молекулууд аажмаар шилжинэ. Шилжилтийн орчин нь гель юм. Овоолдог гель, ялгах гель гэж хоёр төрлийн гель байдаг. Овоолдог гель болон ялгах гель хоёрын гол ялгаа нь овоолгын гельний рН 6.8 байхад ялгах гельний рН 8.8 байна.
Стекийн гель гэж юу вэ?
Стекийн гель нь бага концентрацитай полиакриламид гель бөгөөд SDS-PAGE техникээр илүү төвлөрсөн уусгагч гель (салгагч гель) дээр тавьдаг. Стекийн гель нь электрофорезийн нарийвчлалыг сайжруулахад ашиглагддаг. Дээж дэх уурагуудад нөлөөлдөг овоолох гель ба уусгагч гель хоёрын концентрацийн зөрүүгээс болж нягтрал нэмэгддэг. Стекийн гель дэх полиакриламидын агууламж бага байдаг тул нүхний хэмжээ их байдаг. Энэ нь мөн тусгаарлалтыг нэмэгдүүлэхэд тусалдаг.
Стекийн гель нь 7% орчим полиакриламид агуулсан том нүхтэй сул полиакриламид гель юм. Эдгээр нүхнүүд нь том уургийн молекулуудад ихээхэн саад болдоггүй. Тиймээс энэ гель нь эдгээр уургийн хөдөлгөөнд бага зэрэг нөлөөлдөг. Энэ нь уургийн хөдөлгөөн, хэмжээ зэргээс хамааран тэдгээрийг хоёр гель хооронд төвлөрүүлж ялгадаг.
Зураг 01: SDS-PAGE акриламид гель
Овоолох гелийн рН 6.8 байна. Түүний рН нь гелийг 2 рН нэгжээр уусгахтай харьцуулахад хүчиллэг байдаг. Энэ рН нь ионы хүч багатай тул цахилгаан эсэргүүцэл өндөр байна. Энэ нь гель дэх бусад цэнэгтэй хэсгүүдээс уургийн хөдөлгөөнийг өдөөдөг.
Салах гель гэж юу вэ?
SDS-PAGEtechnique-ийн ялгах гель эсвэл уусгагч гель нь бага концентрацитай овоолох гель дээр байрлуулсан өндөр концентрацитай полиакриламид гель юм. Тусгаарлагч гель нь их хэмжээний полиакриламид (10%) агуулдаг. Энэхүү гельний рН нь рН=8.8 хэвээр байгаа бөгөөд энэ нь овоолох гелээс өндөр рН-ийн түвшин юм.
Зураг 02: Гель электрофорезийн аппарат
Уургийн молекулууд салгах гелд хүрэхэд тэдгээр молекулуудын шилжилт удааширдаг, учир нь ялгах гель нь жижиг нүхтэй өндөр концентрацитай гель бөгөөд уургийн молекулуудын хөдөлгөөнд ихээхэн саад болж чаддаг.. Энэ удаашрал нь бусад уургуудыг гүйцэхийн тулд аажмаар шилжиж, хоёр гель хооронд нарийн, төвлөрсөн тууз үүсгэдэг.
Овоох гель болон тусгаарлах гель хоёрын хооронд ямар холбоотой вэ?
Овоох гель болон тусгаарлах гель хоёулаа нэг төхөөрөмжид ашиглагддаг
Овоох гель болон тусгаарлах гель хоёрын ялгаа юу вэ?
Овоолдог гель ба Тусгаарлагч гель |
|
| Стекийн гель нь бага концентрацитай полиакриламид гель бөгөөд SDS-PAGE техникээр илүү төвлөрсөн уусгагч гель (салгагч гель) дээр байрлуулсан. | SDS-PAGE аргын аргаар ялгах гель эсвэл уусгагч гель нь өндөр концентрацитай полиакриламид гель бөгөөд бага концентрацитай давхаргын гель дээр тавьдаг. |
| Байршил | |
| Савлах гель нь уусгагч (салгах) гель дээр тавигдсан. | Гель электрофорез хийхэд ашигладаг савны ёроолд тусгаарлах гель тавьдаг. |
| Баяжуулалт | |
| Овоолох гелийн агууламж өндөр байна. | Салах гель бага байна. |
| Полиакриламидын агууламж | |
| Овоох гель 7% орчим полиакриламид агуулдаг. | Салах гель 10% орчим полиакриламид агуулдаг. |
| pH | |
| Овоолох гелийн рН 6.8 байна. | Салах гельний рН нь 8.8. |
| Нүхний хэмжээ | |
| Овоолох гель нь том нүхжилттэй байдаг. | Савлах гель нь жижиг нүхжилттэй байдаг. |
| Тогтоол | |
| Овоолох гель илүү сайн нягтардаг. | Туслах гель муу нягтардаг. |
Хураангуй – Овоолдог гель ба тусгаарлах гель
Овоолох гель болон ялгах гель нь тухайн дээжинд уургийн молекулуудыг илүү сайн ялгахад ашигладаг хоёр төрлийн полиакриламид гель юм. Овоолдог гель болон ялгах гель хоёрын ялгаа нь овоолгын гельний рН 6.8 байхад тусгаарлах гельний рН 8.8 байна.
