Үндсэн ялгаа – ДНХ ба РНХ-ийн ялгарал
ДНХ, РНХ-ийн судалгаа нь молекул биологи, биотехнологи, генетикийн үндсэн ойлголтуудыг ойлгоход амин чухал тал юм. Эдгээр судалгааны явцад туршилтын процедурыг явуулахын тулд цэвэр ДНХ ба РНХ дээжийг гаргаж авах шаардлагатай. ДНХ ба РНХ-ийн задралын гол ялгаа нь ДНХ-ийн задралын процесс нь ДНХ-ийг цэвэршүүлдэг бол РНХ-ийн задрал нь РНХ-ийг цэвэршүүлдэгт оршино. ДНХ олборлох үйл явц нь эсийн задрал ба мембраны липид ба уургийн катаболизм, давсны төвлөрсөн уусмалаар катаболит бөөгнөрөх, этанолоор ДНХ-ийг тунадасжуулах гэсэн гурван өөр үе шаттай. Гурван үе шаттай процедур нь хоёр нэмэлт алхмаас бүрдэж болно. РНХ цэвэршүүлэх үйл явц нь дөрвөн өөр үе шатаас бүрдэнэ: эсийн задралд зориулж гуанидиум тиоцианат нэмэх, рибонуклеазыг оролцуулан уураг денатураци хийх, хлороформ, фенол нэмэн РНХ-г салгах, тунадасыг этанолоор угаах.
ДНХ задлах гэж юу вэ?
ДНХ олборлолт нь дээжээс ДНХ-г цэвэршүүлэхэд ашигладаг физик, химийн процесс юм. ДНХ-ийн олборлолт нь молекул биологи, шүүх эмнэлгийн шинжлэх ухааны хүрээнд чухал ач холбогдолтой зүйл юм. Уг процесс нь гурван үндсэн үе шаттай. Эхний ээлжинд сонирхсон эсүүдийг олж авах хэрэгтэй. Дараа нь эсийн задралыг хөнгөвчлөхийн тулд эсийн мембраныг задалж, эсийг нээж, цитоплазмыг ДНХ-ийн хамт ил гаргадаг. Эсийн мембранаас липидийг задлахад гадаргуу идэвхтэй бодис эсвэл бусад угаалгын нунтаг хэрэглэж болно, харин уураг нь протеазаар катаболизмд ордог. Энэ бол нэмэлт алхам юм. Эсийн задралын дараа катаболизмд орсон молекулуудын бөөгнөрөл нь төвлөрсөн давсны уусмалаар хөнгөвчилдөг. Үүний дараа ДНХ-ээс бөөгнөрөл бүхий хог хаягдлыг салгах уусмалыг центрифуг хийнэ. Энэ үе шатанд ялгасан ДНХ нь эсийн мөчлөгийн үед ашигласан урвалж, давстай холилдоно.
Зураг 01: ДНХ-ийн задрал
Үүнийг цаашид цэвэршүүлэхийн тулд дараах алхмуудыг ашиглаж болно. Нэг арга бол этанолын тунадасжуулах арга бөгөөд мөсөн хүйтэн этанолыг тусгаарлагдсан ДНХ-ийн дээжтэй холих явдал юм. ДНХ нь архинд уусдаггүй тул ДНХ-ийн молекулуудын нэгдлээс болж үрэл үүсгэдэг. Ионы хүчийг нэмэгдүүлэх замаар хур тунадасны хэмжээг нэмэгдүүлэхийн тулд натрийн ацетатыг энэ процесст нэмнэ. Үүний тулд этанолыг тунадасжуулах процессоос гадна фенол-хлороформ олборлох процессыг өдөөж болно. Энэ аргын хувьд фенол нь дээжинд агуулагдах уургийг денатурат болгодог. Центрифуг хийсний дараа денатуржуулсан уураг нь органик үе шатанд үлдэж, хлороформтой холилдсон ДНХ молекулууд усан үе шатанд байх болно. Хлороформ нь фенолын үлдэгдлийг арилгах болно. Олборлолт дууссаны дараа ДНХ-г TE буфер эсвэл хэт цэвэр усанд уусгана.
РНХ олборлолт гэж юу вэ?
РНХ цэвэршүүлэх нь биологийн дээжээс РНХ-г цэвэршүүлэх үйл явц юм. Эс, эдэд рибонуклеаз агуулагддаг тул энэ үйл явц нь төвөгтэй байдаг. Рибонуклеазын фермент нь РНХ-ийг хурдан задлах чадвартай. Рибонуклеазын химийн шинж чанар нь маш тогтвортой бөгөөд тэдгээрийг идэвхгүйжүүлэхэд хэцүү байдаг. Рибонуклеазыг саармагжуулах нь сонголт юм. Энэ фермент нь эс, эдэд хаа сайгүй байдаг тул РНХ гаргаж авах тусгай арга техникийг боловсруулдаг. Олон аргуудаас нийтлэг арга нь гуанидиний тиоцинат-фенол-хлороформын олборлолт юм.
Зураг 02: РНХ олборлолт
Гуанидиний тиоцинат-фенол-хлороформыг олборлох арга нь центрифуг болон фазын салалтаас хамаарна. Центрифуг хийх хольц нь усан дээж ба фенол, хлороформоос бүрдсэн усаар ханасан уусмалаас бүрдэнэ. Центрифуг хийсний дараа уусмал нь төвийг сахисан рН (рН 7-8) нөхцөлд дээд усан фаз ба доод органик фазаас бүрдэнэ. РНХ нь усан үе шатанд байдаг. Органик үе шат нь ихэвчлэн фенолд ууссан уураг, хлороформд ууссан липидүүдээс бүрддэг. Хаотроп бодис (усны молекулуудын хоорондох устөрөгчийн холбоог таслах чадвартай молекул) нэмсэн; Үүнийг гуанидиний тиоцианат гэж нэрлэдэг. Энэ бодис нь РНХ-ийг задалдаг рибонуклеаз агуулсан уурагуудыг денатуратжуулах чадвартай бөгөөд эсийн задралд оролцдог. Мөн рибосомын уургуудаас рРНХ-ийг ялгадаг. РНХ цэвэршүүлэх эцсийн шат бол усан фазын тунадасыг этилийн спиртээр угаах явдал юм. РНХ-г мөн шингэн азот ашиглан цэвэрлэж болно.
ДНХ болон РНХ-ийн хандалтын хооронд ямар төстэй зүйл байдаг вэ?
- Олборлох үйл явц хоёуланд нь фенол, хлороформ зэрэг хортой химийн бодисуудыг ашигладаг.
- Центрифуг нь хоёр процесст зайлшгүй шаардлагатай техник юм.
- Этанол нь тунадасыг угааж, цэвэршүүлсэн ДНХ эсвэл РНХ-г авахад хэрэглэгддэг.
ДНХ болон РНХ-ийн задралын хооронд ямар ялгаа байдаг вэ?
ДНХ ба РНХ-ийн задрал |
|
| ДНХ-ийн задрал нь тухайн организм эсвэл дээжээс ДНХ-г гаргаж авдаг процесс юм. | РНХ-г задлах нь дээжээс РНХ ялгах процесс юм. |
| Алхам | |
| ДНХ задлах үйл явц нь хоёр сонголттой гурван өөр алхмаас бүрдэнэ. | РНХ задлах процесс нь дөрвөн өөр алхмаас бүрдэнэ. |
| Урвалт | |
| ДНХ-г задлахад гадаргуугийн идэвхтэй бодис, протеаз (заавал биш), спирт, хлороформ, фенол, натрийн ацетатыг ашигладаг. | Гуанидиум тиоцианат, хлороформ, фенол, этанолыг РНХ ялгахад ашигладаг. |
Хураангуй – ДНХ ба РНХ-ийн ялгаралт
ДНХ ба РНХ-ийн олборлолт нь молекул биологи, генетик, биотехнологийг судлах туршилтын процедурын амин чухал хэсэг юм. Энэ хоёр процесс нь ижил төстэй урвалжуудыг агуулдаг боловч РНХ-ийн олборлолт нь рибонуклеазын идэвхийг бууруулдаг гуанидиум тиоцианат гэж нэрлэгддэг тусгай урвалжийг ашигладаг. Энэ бол ДНХ болон РНХ-ийн задралын хоорондох гол ялгаа юм.
ДНХ ба РНХ-ийн задралын PDF хувилбарыг татаж авах
Та энэ нийтлэлийн PDF хувилбарыг татаж аваад офлайн зорилгоор ашиглах боломжтой. PDF хувилбарыг эндээс татаж авна уу ДНХ ба РНХ-ийн ялгах ялгаа
