Ургамал, амьтны ДНХ-ийн ялган авах гол ялгаа нь ургамлын ДНХ-ийн олборлолтод малын ДНХ-ийн олборлолт хийх явцад эд эсийг хуурай мөс эсвэл шингэн азотоор нунтаглах замаар эсийн ханыг хугалах шаардлагатай байдаг., амьтны эсэд эсийн хана байдаггүй тул энэ алхамыг хийх шаардлагагүй.
Геномын ДНХ нь ургамал, амьтны эсийн удамшлын материал юм. Геномын ДНХ нь ургамал, амьтан бүрт өвөрмөц байдаг. Сайн чанарын ДНХ-ийн ДНХ гаргаж авах нь молекулын судалгааны урьдчилсан нөхцөл юм. Организмын ДНХ-ийг таних, өвчнийг оношлох, тодорхой ген, дарааллыг илрүүлэх, шүүх эмнэлгийн зорилгоор, эцэг тогтоох шинжилгээ, геномын дараалал тогтоох, эм боловсруулах гэх мэт зорилгоор гаргаж авдаг. ДНХ-г задлах арга нь эсийн төрлөөс хамаарч өөр өөр байдаг - энэ нь амьтны эс эсвэл ургамлын эс үү.
Ургамлын ДНХ-ийн олборлолт гэж юу вэ?
Ургамлын эс дэх ДНХ-г янз бүрийн молекулын судалгаанд зориулж гаргаж авдаг. Энэ нь бүрэн бүтэн, цэвэр геномын ДНХ гаргаж авах шаардлагатай. Иймээс амьтны эсээс ДНХ гаргаж авах протоколоос өөр өөр төрлийн ДНХ олборлох протоколууд байдаг. Учир нь ургамлын эсүүд эсийн ханатай байдаг тул эсийн агуулгыг гадагшлуулахын тулд хугарах ёстой.
Олборлолтыг ихэвчлэн хуурай мөс юм уу шингэн азотоор ургамлын эд эсийг зуурмаг, шавраар нунтаглах замаар хийдэг. Дараа нь эсийн мембран эвдэрч, эсийн агууламжийг экстракцийн буферт авдаг. Энэ нь ихэвчлэн угаалгын нунтаг ашиглан хийгддэг; SDS (натрийн додецил сульфат) эсвэл CTAB (цетилтриметиламмонийн бромид) буфер. Гарсан ДНХ нь эндоген нуклеазуудаас EDTA гэх мэт хелатлагч бодис ашиглан хамгаалагдсан байдаг. Түүнээс гадна уурагуудыг хлороформ эсвэл фенол ашиглан ДНХ-ээс тусгаарладаг.
Зураг 01: Ургамлын ДНХ олборлолт
Ургамал нь полисахарид, полифенол, түүний дотор флавоноид болон бусад хоёрдогч метаболитуудыг нэгтгэдэг. Эдгээр нэгдлүүд нь цэвэр геномын ДНХ-ийн олборлолтод саад учруулдаг. Тиймээс ихэнх ургамлын ДНХ олборлох протоколууд нь эдгээр нэгдлүүдийг устгах цезийн хлоридын нягтын градиент техник гэх мэт өөр нэг алхамыг агуулдаг.
ДНХ задлах протоколуудын ихэнх нь ДНХ-ийн задралд шинэ навчны дээж ашиглахыг зөвлөдөг. Зарим аргууд нь шингэн азот, фенол зэрэг аюултай химийн бодисуудыг агуулдаггүй. CTAB (Cetyl trimethylammonium bromide) протокол нь өндөр чанартай ургамлын геномын ДНХ-г гаргаж авах боломжийг олгодог алдартай ургамлын ДНХ олборлох протокол юм. Энэ нь ургамлын ДНХ гаргаж авах энгийн, аюулгүй, найдвартай, зардал багатай арга юм. Бусад аргуудын ихэнх нь CTAB аргын өөрчлөгдсөн хувилбарууд юм.
Амьтны ДНХ олборлолт гэж юу вэ?
Амьтны ДНХ олборлолт нь молекулын шинжилгээнд зориулж амьтны эсээс геномын ДНХ-г гаргаж авах явдал юм. Ургамлын ДНХ-ийн олборлолтоос ялгаатай нь амьтны эсэд эсийн хана байхгүй тул эсийн ханыг задлах шаардлагагүй. Цусны эсүүд нь янз бүрийн зориулалтаар ашиглагддаг амьтны эсийн хамгийн түгээмэл төрөл юм.
Зураг 02: ДНХ-ийн задрал
Фенол-хлороформын арга нь цусны эсийн хамгийн сайн сонголтуудын нэг юм. Энэ аргаар ДНХ гаргаж авахад ДНХ-ийн гарц, чанар өндөр байдаг. Энэ нь шингэн-шингэн ДНХ-ийн хандлах протокол бөгөөд энэ арга нь ДНХ-ийн молекулуудыг хоорондоо холилдохгүй уусмалд уусах чадвараар нь ялгадаг. Фенол, хлороформ, изоамил спирт нь энэ аргын шилдэг гурван найрлага юм.
Ургамал, амьтны ДНХ-ийн ялган авах хоёр ижил төстэй зүйл юу вэ?
- Ургамал болон амьтны ДНХ-г ялган авах явцад эсийн мембран эвдэрсэн байх ёстой.
- ДНХ нь эндоген нуклеазаас хамгаалагдсан байх ёстой.
- Түүгээр ч барахгүй ДНХ-ийн зүсэлтээс урьдчилан сэргийлэх хэрэгтэй.
- Арилжааны иж бүрдэл нь ургамлын ДНХ болон амьтны ДНХ-г гаргаж авах боломжтой.
- Ургамал, амьтны ДНХ-ийн хандлах ихэнх аргуудыг тасралтгүй өөрчлөх, стандартчилах шаардлагатай.
Ургамал ба амьтны ДНХ-ийн ялгарал юу вэ?
Ургамал, амьтны ДНХ-ийн ялган авах гол ялгаа нь ургамлын ДНХ-г гаргаж авахдаа ургамлын эдийг хуурай мөс эсвэл шингэн азотоор нунтаглаж эсийн ханыг задлах шаардлагатай байдаг бол амьтны ДНХ-г олборлоход ийм алхам хийх шаардлагагүй байдаг. эсүүд эсийн ханагүй байдаг. CTAB арга нь ургамлын ДНХ задлах хамгийн шилдэг аргуудын нэг бол фенол-хлороформын арга нь амьтны ДНХ-г задлах шилдэг аргуудын нэг юм.
Доорх инфографикийн хүснэгтэд ургамал, амьтны ДНХ-ийн хандалтын ялгааг харуулав.
Товч мэдээлэл – Ургамал ба амьтны ДНХ-ийн ялгарал
Өөр өөр төрлийн эсээс ДНХ гаргаж авах өөр өөр аргууд байдаг. Тиймээс ургамлын ДНХ олборлох протокол нь амьтны эсийн ДНХ олборлох протоколоос ялгаатай. Ургамлын ДНХ-ийн олборлолт нь эсийн хана, эсийн мембран, цөмийн мембраныг тасалдуулахыг шаарддаг бол амьтны ДНХ-ийн олборлолтод эсийн мембран, цөмийн мембраныг задлах шаардлагатай байдаг. Хамгийн чухал нь амьтны эсийн ДНХ-ийн олборлолт нь хуурай мөс эсвэл шингэн азотоор нунтаглах замаар эсийн ханыг тасалдуулах шаардлагагүй юм. Тиймээс энэ нь ургамал, амьтны ДНХ-ийн ялгах гол ялгаа юм.
