ПГУ ба Бодит цагийн ПГУ
ПГУ буюу Полимеразын гинжин урвал нь орчин үеийн молекул биологид хувьсгал хийсэн нээлт бөгөөд анх химич Кари Муллис 1983 онд бүтээсэн бөгөөд энэ нь нарийн төвөгтэй ДНХ-ийн нэг дарааллыг олшруулах боломжийг олгодог. ПГУ-ын үндсэн санаа нь ДНХ-ийн дарааллын эсрэг талын хэлхээг нөхдөг хоёр праймер бие бие рүүгээ чиглэсэн байдаг; праймерууд нь нэмэлт хэлхээ үүсгэдэг бөгөөд тус бүр нь нөгөө праймерыг агуулдаг. Иймээс үр дүн нь хоёр праймерын хооронд байрлах ДНХ-д тохирох их хэмжээний дараалал юм. ДНХ полимеразын ферментийг ПГУ-д праймеруудыг сунгахад ашигладаг. ДНХ полимераз нь халуунд тэсвэртэй фермент бөгөөд загвар ДНХ-ийн денатурацид ашиглагддаг өндөр температурт (94-95 °C) амьдрах чадвартай.
ПГУ нь гурван үе шаттай, тухайлбал, денатурацийн давталт, праймерыг задлах, ДНХ-ийн нийлэгжилт. Энэ урвалыг гүйцэтгэхийн тулд термоцикл машиныг ашигладаг бөгөөд ингэснээр температурыг хурдан бөгөөд зөв өөрчлөх програмчлагдах боломжтой. ПГУ-ын хэрэглээ нь эрүүгийн мөрдөн байцаалт, ДНХ-ийн хурууны хээ, эмгэг төрүүлэгчдийг илрүүлэх, эрт үеийн хүний ДНХ-ийн шинжилгээ юм.
Уламжлалт ПГУ гэж юу вэ?
Ердийн ПГУ-ын гурван үндсэн үе шат байдаг, тухайлбал; ДНХ-ийн олшруулалтын үе шат, ПГУ-ыг ялгах, бүтээгдэхүүнийг илрүүлэх. ДНХ-ийн сегментийг салгах нь ихэвчлэн агароз гель электрофорезын тусламжтайгаар хийгддэг. Дараа нь бүтээгдэхүүнийг этейдуим бромидоор будна. Эцэст нь, хэт ягаан туяаны гэрлийн дор гель дээрх туузыг дүрслэх замаар илрүүлдэг. Тиймээс уламжлалт ПГУ-ын эцсийн үр дүнг тоогоор илэрхийлдэггүй. Ер нь ердийн ПГУ нь зөвхөн нэг параметрийг илрүүлэх боломжтой.
Бодит цагийн ПГУ гэж юу вэ?
Бодит цагийн ПГУ-аар бүтээгдэхүүнүүд нийлэгждэг тул бүтээгдэхүүний олшруулалтыг илрүүлэх боломжтой. Технологи хөгжихийн хэрээр ПГУ нь ялангуяа хүнсний бүтээгдэхүүн дэх бактерийг илрүүлэх, тодорхойлох маш түгээмэл арга болжээ. Бодит цагийн ПГУ нь флюресцент илрүүлэх чадвартай флюресцент будагч систем болон термоцикл ашигладаг.
Ердийн ПГУ ба Бодит цагийн ПГУ-ын ялгаа нь юу вэ?
• Уламжлалт ПГУ нь олшруулсан ПГУ-ын бүтээгдэхүүнийг шинжлэхдээ гель электрофорез ашигладаг тул илүү их цаг зарцуулдаг. Үүний эсрэгээр, бодит цагийн ПГУ нь урвалын эхний үе шатанд олшруулалтыг илрүүлж чаддаг тул цаг хугацаа бага зарцуулдаг.
• Бодит цагийн ПГУ нь ПГУ-ын экспоненциал өсөлтийн үе шатанд өгөгдлийг цуглуулдаг бол уламжлалт ПГУ нь урвалын төгсгөлийн цэг дээр өгөгдлийг цуглуулдаг.
• Уламжлалт ПГУ-ын эцсийн цэгийн үр дүн тийм ч нарийн биш байж болох ч бодит цагийн ПГУ-ын үр дүн маш нарийн байдаг.
• Бодит цагийн ПГУ нь ердийн ПГУ-аас илүү мэдрэмтгий.
• Уламжлалт ПГУ-ын нягтрал маш муу байдаг бол бодит цагийн ПГУ нь өндөр нарийвчлалтай учир маш бага өөрчлөлтийг илрүүлдэг.
• Уламжлалт ПГУ-ын төгсгөлийн цэгийн илрүүлэлт богино динамик мужтай байдаг бол бодит цагийн ПГУ-ын илрүүлэлт нь өргөн динамик мужтай.
• Уламжлалт ПГУ-аас ялгаатай нь автоматжуулсан илрүүлэх арга нь бодит цагийн ПГУ-д байдаг.
• Уламжлалт ПГУ нь бодит цагийн ПГУ-аас илүү боловсронгуй бөгөөд хөдөлмөр их шаарддаг.
• Бодит цагийн ПГУ-аас ялгаатай нь ердийн ПГУ нь үхсэн ба амьд бактерийг ялгаж чаддаггүй.
• Бодит цагийн ПГУ нь бүтээгдэхүүнийг илрүүлэхийн тулд флюресцент будгийн системийг ашигладаг бол ердийн ПГУ нь агароз гель орчин дахь туузыг дүрслэхийн тулд этидиум бромид болон хэт ягаан туяаг ашигладаг.
