Ник орчуулга ба төгсгөл дүүргэлтийн гол ялгаа нь ник орчуулга нь төрөл бүрийн эрлийзжих урвалд зориулсан шошготой ДНХ-ийн датчик үүсгэдэг процесс бөгөөд төгсгөл дүүргэлт нь нэг судалтай нуклеотидуудыг нэмж мохоо фрагментуудыг үүсгэдэг арга юм.
Ник орчуулга болон төгсгөл дүүргэлт нь молекул биологид хэрэглэгддэг хоёр арга юм. Ник орчуулгыг тусгай нуклеотидын дарааллыг илрүүлэхийн тулд эрлийзжүүлэх датчикуудыг шошголоход ашигладаг. Төгсгөлийн дүүргэлт нь наалдамхай үзүүртэй, нэг судалтай давхраатай мохоо хэлтэрхий хийхэд хэрэглэгддэг. Энэ хоёр техник нь маш чухал бөгөөд молекулын судалгааны лабораторид тогтмол хийдэг.
Ник орчуулга гэж юу вэ?
Ник орчуулга нь хатаах, in situ эрлийзжүүлэх, флюресцент in situ эрлийзжүүлэх гэх мэт янз бүрийн молекул биологийн техникүүдэд шошготой датчик бэлтгэхэд ашигладаг чухал арга юм. Энэ нь ДНХ шошголох in vitro арга юм. ДНХ мэдрэгч нь тодорхой ДНХ эсвэл РНХ-ийн дарааллыг тодорхойлоход ашиглагддаг. Шошготой датчикийн тусламжтайгаар нуклейн хүчлийн нийлмэл хольцоос тодорхой хэлтэрхийг тэмдэглэж эсвэл дүрсэлж болно. Тиймээс шошготой датчикуудыг янз бүрийн техник ашиглан бэлтгэдэг. Ник орчуулга нь DNase 1 ба ДНХ полимераз 1 ферментийн тусламжтайгаар шошготой датчик гаргадаг ийм аргуудын нэг юм.
Зураг 01: Никийн орчуулга
Ник орчуулгын процесс нь DNase 1 ферментийн үйл ажиллагаанаас эхэлдэг. DNase 1 нь нуклеотидын хоорондох фосфодиэстерийн холбоог таслах замаар давхар судалтай ДНХ-ийн фосфатын нуруунд ник үүсгэдэг. Ник үүссэний дараа нуклеотидын чөлөөт 3′ OH бүлэг үүсч, үүн дээр ДНХ полимераз 1 фермент үйлчилнэ. ДНХ-полимераз 1-ийн 5′-аас 3′ экзонуклеазын идэвхжил нь ДНХ-ийн хэлхээний 3′ чиглэл рүү нуклеотидыг никээс зайлуулдаг.
Үүний зэрэгцээ ДНХ-полимераз 1 ферментийн полимеразын идэвхжил ажиллаж, устгасан нуклеотидыг орлуулах нуклеотидуудыг нэмдэг. Хэрэв нуклеотидууд шошгологдсон бол солигдсон нуклеотидууд хийгдэх бөгөөд энэ нь ДНХ-ийг танихын тулд тэмдэглэнэ. Эцэст нь энэхүү шинээр нийлэгжүүлсэн шошготой ДНХ-г янз бүрийн эрлийзжих урвалд датчик болгон ашиглаж болно.
Төгсгөлийн дүүргэлт гэж юу вэ?
Төгсгөлийн дүүргэлт нь молекул биологид мохоо хэлтэрхий хийхэд ашигладаг техник юм. Хязгаарлагдмал хоол боловсруулах нь хэт уналт бүхий хэлтэрхий үүсгэдэг. Эдгээр фрагментууд нь плазмидын векторууд руу залгахад тохирохгүй байж болно. Тохиромжгүй төгсгөлүүдийг холбохын тулд векторуудыг ихэвчлэн бүдгэрүүлдэг. Тиймээс нэмэлт хэлхээнд нуклеотидуудыг нэмж, хэт өнгийг полимержих загвар болгон ашиглах замаар хэтэрсэн хэсгүүдийг бүдгэрүүлж болно. Энэ процессыг төгсгөл дүүргэх гэж нэрлэдэг.
ДНХ Полимеразын I болон Т4 ДНХ Полимеразын Кленовын фрагмент зэрэг ДНХ полимеразууд төгсгөлийн дүүргэлтийг катализатор болгодог. Тэд (5′ → 3′) дүүргэхийн тулд нуклеотид нэмж, буцааж зажлах (3′ → 5′). Наалдамхай үзүүрийг дүүргэсний дараа тэдгээр нь мохоо болж, вектор руу залгахад бэлэн болно.
Цаашилбал, төгсгөлийн дүүргэлтийг ДНХ молекулуудыг шошголоход ашиглаж болно. Гэхдээ энэ нь зөвхөн наалдамхай төгсгөлтэй ДНХ молекулуудыг шошголоход л ашиглагдана. Ник орчуулгатай харьцуулахад төгсгөл дүүргэлт нь ДНХ-ийн эвдрэлийг маш ховор үүсгэдэг илүү зөөлөн арга юм.
Никийн орчуулга болон төгсгөлийн бөглөх хоёрын ижил төстэй зүйл юу вэ?
- Ник орчуулга болон төгсгөл дүүргэлт хоёулаа молекул биологийн техник юм.
- Тэдгээрийг датчикуудыг шошголоход ашиглаж болно.
- Хоёулаа in vitro
Никийн орчуулга болон төгсгөлийн бөглөх хоёрын ялгаа юу вэ?
Ник орчуулга нь эрлийзжүүлэх зориулалттай шошготой датчик үүсгэдэг техник юм. Үүний эсрэгээр, төгсгөлийн дүүргэлт нь векторууд руу залгахад зориулж мохоо хэлтэрхий үүсгэдэг техник юм. Тиймээс, энэ бол ник орчуулга болон төгсгөлийн дүүргэлтийн хоорондох гол ялгаа юм. Цаашилбал, Ник орчуулгад 5’-3′ экзонуклеазын идэвхжил шаардлагатай бол төгсгөлийн дүүргэлтэд 5’-3′ экзонуклеазын идэвхжил шаардлагагүй.
Доорх инфографик нь ник орчуулга болон төгсгөлийн бөглөх хоёрын ялгааг илүү дэлгэрэнгүй харуулав.
Хураангуй – Ник орчуулга ба төгсгөл дүүргэлт
Ник орчуулга нь ДНХ-д цацрагийн шошготой нуклеотидыг шингээх арга юм. Энэ нь DNase 1 болон E. coli ДНХ полимераз 1 ферментийн үйл ажиллагаанд үндэслэн шошготой датчикуудыг нэгтгэдэг. Нөгөө талаас төгсгөлийн дүүргэлт нь мохоо хэлтэрхий гаргадаг техник юм. Хэсэг хэсгүүд нь наалдамхай үзүүртэй (нэг судалтай) байвал вектор болгон холбохын тулд тэдгээрийг мохоо үзүүртэй болгох шаардлагатай. Төгсгөлийн дүүргэлт нь тохирох нуклеотидуудыг нэмж, тэдгээрийг холбоход тохиромжтой болгохын тулд мохоо төгсгөл хэсгүүдийг үүсгэдэг. Тиймээс энэ нь хоч орчуулга болон төгсгөлийн бөглөх хоёрын ялгааг нэгтгэн харуулав.
