Үндсэн ялгаа – Ник орчуулга ба праймер өргөтгөл
Ник орчуулга болон праймер өргөтгөл нь молекул биологийн чиглэлээр хийгддэг хоёр чухал арга юм. Ник орчуулга ба праймер өргөтгөл хоёрын гол ялгаа нь ник орчуулгын процесс нь бусад эрлийзжүүлэх арга техникт шошготой датчик үүсгэдэг бол праймер өргөтгөлийн арга нь холимогоос тодорхой РНХ-ийн дарааллыг тодорхойлж, мРНХ-ийн илэрхийллийн талаарх мэдээллийг илчилдэгт оршино. Хоёр арга хоёулаа маш чухал бөгөөд молекулын судалгааны лабораторид тогтмол хийдэг.
Ник орчуулга гэж юу вэ?
Ник орчуулга нь хатаах, in situ эрлийзжүүлэх, флюресцент in situ эрлийзжүүлэх гэх мэт янз бүрийн молекул биологийн техникүүдэд шошготой датчик бэлтгэхэд ашигладаг чухал техник юм. Энэ нь ДНХ шошголох in vitro арга юм. ДНХ мэдрэгч нь тодорхой ДНХ эсвэл РНХ-ийн дарааллыг тодорхойлоход ашиглагддаг. Шошготой датчикийн тусламжтайгаар нуклейн хүчлийн нийлмэл хольцоос тодорхой хэлтэрхийг тэмдэглэж эсвэл дүрсэлж болно. Тиймээс шошготой датчикуудыг янз бүрийн техникт ашиглах янз бүрийн арга техникийг ашиглан бэлтгэдэг. Ник орчуулга нь DNase 1 ба ДНХ полимераз 1 ферментийн тусламжтайгаар шошготой датчик гаргадаг ийм аргуудын нэг юм.
Ник орчуулгын үйл явц нь DNase 1 ферментийн үйл ажиллагаанаас эхэлдэг. DNase 1 нь нуклеотидын хоорондох фосфодиэстерийн холбоог таслах замаар давхар судалтай ДНХ-ийн фосфатын нуруунд цоорхой үүсгэдэг. Ник үүссэний дараа нуклеотидын чөлөөт 3' OH бүлэг гарч ирэх ба үүн дээр ДНХ полимераз 1 фермент үйлчилнэ. ДНХ полимераз 1-ийн 5'-аас 3' экзонуклеазын идэвхжил нь ДНХ-ийн хэлхээний 3' чиглэл рүү нуклеотидыг никээс зайлуулдаг. Үүний зэрэгцээ ДНХ полимераз 1 ферментийн полимеразын идэвхжил ажиллаж, устгагдсан нуклеотидыг орлуулахын тулд нуклеотид нэмж өгдөг. Хэрэв нуклеотидууд шошготой байсан бол шошготой нуклеотидуудаар солигдох бөгөөд энэ нь ДНХ-ийг танихын тулд тэмдэглэнэ. Энэхүү шинээр нийлэгжүүлсэн шошготой ДНХ-г молекул биологийн янз бүрийн эрлийзжих урвалд датчик болгон ашиглаж болно.
Зураг 01: Ник орчуулгын процесс
Праймер өргөтгөл гэж юу вэ?
Праймер өргөтгөл нь РНХ-ийн холимогоос тодорхой РНХ-ийн дарааллыг олж, мРНХ транскриптийн 5' төгсгөлийг олоход ашигладаг техник юм. Мөн РНХ-ийн бүтэц, илэрхийлэлийг судлахад ашигладаг. Праймерын өргөтгөлийн аргыг шошготой праймер эсвэл шошготой нуклеотидын тусламжтайгаар гүйцэтгэдэг. Хэрэв шошготой праймерыг ашиглаж байгаа бол энэ нь cDNA-ийн нийлэгжилтэнд ашиглагддаг нуклеотидыг шошголох шаардлагагүй болно. Энэ техникт хэд хэдэн үе шат байдаг. Энэ нь дээжээс РНХ гаргаж авахаас эхэлдэг. Дараа нь шошготой олигонуклеотидын праймерыг тодорхой РНХ дарааллын cDNA-г нийлэгжүүлэхэд шаардлагатай бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн хамт хольцонд нэмнэ. Холимогоос нэмэлт дарааллаар праймер ангална. Урвуу транскриптаза фермент нь РНХ дарааллын нэмэлт ДНХ-г (cDNA) нийлэгжүүлдэг. Дээжинд РНХ-ийн тодорхой дараалал байгаа үед л праймерын задрал ба урвуу транскрипци үүсдэг. Эцэст нь денатуржуулсан гель электрофорез хийх үед РНХ-ийн дарааллын хэмжээг тодорхойлж болно. Мөн праймер өргөтгөлийн аргаар мРНХ (транскрипц эхлэх газар) дарааллын +1 суурийг олоход хялбар байдаг. Илүүдэл праймер ашигласан тохиолдолд дээжинд байгаа мРНХ-ийн хэмжээг энэ аргаар тодорхойлж болно.
Зураг 02: Праймерын өргөтгөл
Ник орчуулга болон праймер өргөтгөл хоёрын ялгаа нь юу вэ?
Ник Орчуулга ба Праймер Өргөтгөл |
|
| Ник орчуулга нь төрөл бүрийн эрлийзжих урвалд зориулсан шошготой ДНХ-ийн датчик үүсгэдэг процесс юм. | Праймер өргөтгөл нь тодорхой РНХ олох эсвэл генийн илэрхийлэлийг судлахад ашигладаг техник юм. |
| Ашигласан ферментүүд | |
| DNase 1 болон ДНХ полимеразын ферментүүдийг ашигладаг. | Урвуу транскриптаза ферментийг ашигласан. |
| Ач холбогдол | |
| Никийн орчуулга нь тодорхой ДНХ-ийн дарааллын тэмдэглэгээг хөнгөвчилдөг. | Праймер өргөтгөл нь тодорхой мРНХ-ийн дарааллын хэмжээ болон дээжинд байгаа хэмжээг илрүүлэх боломжийг олгодог. |
Хураангуй – Ник орчуулга ба Праймер өргөтгөл
Ник орчуулга нь DNase 1 болон E coli ДНХ полимераз 1 ферментийн үйл ажиллагаанд үндэслэн шошготой датчикуудыг нэгтгэхэд ашигладаг арга юм. Энэ нь өөр өөр эрлийзжүүлэлтийн техникээс өмнө лабораторид ашигладаг in vitro арга юм. Ник хөрвүүлэх явцад ДНХ полимераз 1-ийн 5'-3' экзонуклеазын идэвхжил нь нуклеотидыг никээс түрүүлж зайлуулж, ДНХ полимераз 1-ийн полимеразын идэвхжил нь арилгасан нуклеотидыг никийн ард хаяглагдсан нуклеотидуудаар орлуулдаг. Праймер өргөтгөл нь холимогоос тодорхой РНХ хуулбарыг илрүүлэх, сонирхлын РНХ-ийн хэмжээ, хэмжээг тодорхойлоход хэрэглэгддэг арга юм. Энэ бол ник орчуулга болон праймер өргөтгөлийн хоорондох ялгаа юм.
