Үндсэн ялгаа – Хувилбар ба дэд клон
Клончлол ба дэд хувилга гэдэг нь сонирхол татахуйц ДНХ эсвэл ген агуулсан генетикийн хувьд ижил эс эсвэл организм үүсгэдэг молекул биологийн процедур юм. Клончлол гэдэг нь сонирхож буй ген эсвэл ДНХ-ийг векторт оруулах, түүнийг эзэн бактерийн дотор хуулбарлах, удамшлын бүтцийн яг хуулбар болох эс эсвэл организмыг үйлдвэрлэх арга юм. Дэд клонжуулалт гэдэг нь векторт аль хэдийн оруулсан сонирхсон генийг хоёрдогч векторт оруулах, түүнийг эзэн бактерийн дотор хуулбарлах, эс эсвэл организмын генетикийн хувьд ижил хуулбарыг үйлдвэрлэх арга юм. Клончлох ба дэд хуваах хоёрын гол ялгаа нь клончлохдоо сонирхсон генийг вектороор холбосоны дараа клончлох процессыг үргэлжлүүлэх ба дэд хувилах үед аль хэдийн хувилсан генийг эх вектороос салгаж, дахин оруулах явдал юм. хүлээн авагчийн вектор болон үйл явцыг үргэлжлүүлнэ үү.
Клонжуулалт гэж юу вэ?
Клончлох нь генетикийн хувьд ижил организм эсвэл эсийг үүсгэдэг процедур юм. Байгалийн хувьд клонжуулалт нь бэлгийн бус нөхөн үржихүйн замаар явагддаг. Генийн рекомбинаци, өөрчлөлт байхгүй тохиолдолд охин эсүүд эцэг эхийнхээ генетикийн бүтцийг хүлээн авдаг. Прокариот болон эукариот организмууд нь хоёртын хуваагдал, нахиалах, митоз гэх мэт замаар клон үүсгэдэг. Молекул биологийн хувьд ген эсвэл ДНХ-ийн тодорхой хэсгүүдийг хувилах нь тухайн ДНХ-ийн хэсгийн бүтэц, үйл ажиллагааг судлах түгээмэл арга юм.
Молекулын клончлолын гол зорилго нь ДНХ-ийн сонирхсон хэсэг (гол төлөв ген) агуулсан генетикийн хувьд ижил эс буюу организмын сая сая хуулбарыг гаргах явдал юм. Энэ нь өөр хүний генетикийн хуулбартай организмуудыг бий болгодог. Юуны өмнө бүтцийн болон үйл ажиллагааны мэдээллийг олж авах, ДНХ-ийн дараалал тогтоох зорилгоор молекулын судалгаанд тусгай генүүдийг хувилдаг. Мөн тодорхой уураг эсвэл бүтээгдэхүүнийг их хэмжээгээр үйлдвэрлэхэд клонжуулалтыг өргөн ашигладаг.
Хувилах журам
Клончлох процедурын үндсэн алхамууд дараах байдалтай байна.
- Сонирхолтой генийг тодорхойлох, тусгаарлах. (Сонирхолтой генийг ПГУ-аар олшруулах).
- Сонирхолтой генийн задралыг хязгаарлах (Хязгаарлалтын эндонуклеаз генийг таслав).
- Вектор ДНХ-ийн задралыг хязгаарлах. (Вектор ДНХ-г мөн адил хязгаарлалтын эндонуклеаза ашиглан таслав).
- Вектор руу ген оруулах, рекомбинант молекул үүсэх.
- Рекомбинант векторыг эзэн нян болгон хувиргах.
- Хувирсан бактерийг тусгаарлах, тодорхойлох (плазмидын вектор нь сонгогдох генийг агуулсан байх ёстой, ихэвчлэн хувирсан бактерийг илрүүлэх антибиотик эсэргүүцэх ген).
- Хост доторх рекомбинант генийн илэрхийлэл.
Зураг_01: Хувилах журам
Дэд клон гэж юу вэ?
Дэд клонжуулалт гэдэг нь генийн хүссэн функцийг олж авахын тулд генийн илэрхийлэлийг харахын тулд сонирхсон генийг нэг вектороос нөгөө вектор руу шилжүүлэх процедур юм. Энэ аргад хоёр вектор оролцдог; тухайлбал, эх вектор ба очих вектор. Дэд клончлолд хувилсан оруулгууд дахин хоёр дахь вектор руу шилждэг. Эхний вектороос генийг хоёр дахь вектор руу шилжүүлэх зорилго нь эхний векторын хийж чадаагүй зүйлийг олж авах эсвэл ДНХ-ийн аль хэдийн хувилсан фрагмент доторх генийг дахин салгаж, дангаар нь илэрхийлэх явдал юм. Энэ процедурын эхэнд хязгаарлалтын ферментийг ашигладаг.
Дэд клон хийх журам
Дэд клон хийх үндсэн алхамууд дараах байдалтай байна.
- Рекстрикцийн эндонуклеазын тусламжтайгаар донорын плазмид (эцэг эх вектор) дахь сонирхсон ДНХ-ийг салгах.
- Сонирхолтой ДНХ-ийн ПГУ-ын олшруулалт.
- ПГУ-ын бүтээгдэхүүнийг (сонирхолтой ДНХ) гель электрофорезээр цэвэршүүлэх.
- Эх плазмидын сонирхсон ДНХ-г салгахад ашигладаг ижил хязгаарлалтын эндонуклеазаар хүлээн авагчийн плазмидыг нээх.
- Сонирхолтой ДНХ-г (ген) хүлээн авагчийн плазмид руу холбож дэд клонжуулсан плазмид үүсгэнэ.
- Дэд клонжуулсан векторыг чадварлаг хост нян болгон хувиргах.
- Өөрчлөгдсөн эсийн шинжилгээ.
- Пласмидын ДНХ-г цэвэршүүлж, хүссэн бүтээгдэхүүнээ авахын тулд ДНХ-ийн дараалал эсвэл генийг илэрхийлэхэд хэрэглэнэ.
Дэд клонжуулалтыг хувилсан генийн бүлгээс нэг генийг тусгаарлах эсвэл сонирхсон генийн яг үйл ажиллагааг харахын тулд тухайн генийг ашигтай плазмид руу шилжүүлэх шаардлагатай үед хийдэг.
Зураг_02: Дэд клон хийх журам
Cloning болон Subcloning хоёрын ялгаа нь юу вэ?
Cloning vs Subcloning |
|
| Клончлох нь генетикийн хувьд ижил организм эсвэл эсийг үүсгэдэг процедур юм. | Дэд клонжуулалт нь генийн хүссэн функцийг олж авахын тулд генийн илэрхийлэлийг харахын тулд сонирхсон генийг нэг вектороос нөгөө вектор руу шилжүүлэх процедур юм. |
| Процесс | |
| Сонирхолтой ДНХ-г организмаас салгаж, векторт нэг удаа оруулж, хувилсан | Аль хэдийн хувилсан ДНХ-г эхний вектороос салгаж, хоёр дахь вектор руу оруулан хувилсан. |
| Вектороор хөдөлгөөн оруулах | |
| Нэг вектороос нөгөө вектор руу оруулга (сонирхолтой ДНХ) зөөдөггүй. | Оруулгыг эх вектороос очих вектор руу зөөнө. |
Хураангуй – Хувилбар ба дэд клон
Клончлол нь оруулсан ген эсвэл сонирхож буй ДНХ-тэй генетикийн хувьд ижил эс эсвэл организмыг үүсгэдэг. Энэ нь сонирхож буй ДНХ-ийг салгаж, вектор руу оруулах, хост бактерийн доторх илэрхийлэлээр дамждаг. Дэд клонжуулалт нь клонжуулалттай ижил төстэй алхмуудыг хуваалцдаг. Гэсэн хэдий ч дэд хуваахдаа аль хэдийн хувилсан ДНХ-ийн фрагментийг (сонирхолтой ген) вектор руу оруулж, эзэн нян болгон хувиргадаг. Энэ бол клон болон дэд хувилах хоёрын гол ялгаа юм.
