Үндсэн ялгаа – RNASE A ба RNASE H
Рибонуклеазууд нь РНХ-ийг жижиг нэгж болгон задалдаг нуклеазууд юм. Тэдгээрийг хоёр төрөлд хувааж болно; эндорибонуклеаз ба эксорибонуклеазууд. Эндорибонуклеаз нь нэг судалтай эсвэл хоёр судалтай РНХ-ийг задалдаг эндонуклеаз юм. Энэ нь РНХ полинуклеотидын гинжин хэлхээний фосфодиэфирийн холбоог тасалдаг. Жишээ нь RNase A, RNase III, RNase T1, RNase P ба RNase H. Эксорибонуклеаз нь РНХ молекулын 5' эсвэл 3' төгсгөлийн төгсгөлийн нуклеотидыг зайлуулж РНХ-ийг задалдаг экзонуклеаз юм. Жишээ нь RNase R, RNase II, RNase D, RNase PH. RNASE A ба RNASE H хоёрын гол ялгаа нь RNase A нь нойр булчирхайн рибонуклеаза бөгөөд нэг судалтай РНХ-г жижиг хэсгүүдэд задалдаг, харин RNase H нь РНХ-ДНХ-ийн эрлийз дэх РНХ-ийг жижиг хэсгүүдэд задалдаг өвөрмөц бус фермент юм. гидролизийн механизм.
RNASE A гэж юу вэ?
RNase A нь нойр булчирхайн рибонуклеаза бөгөөд нэг судалтай РНХ-ийн 3' төгсгөл дэх хосгүй цитозин ба урацилийн үлдэгдлийг тусгайлан задалдаг. RNase H нь илүү их давсны концентрацид (0.3M ба түүнээс дээш NaCl концентраци) ажилладаг. Гидролизийн урвал нь хоёр үе шаттай. Энэ нь 2', 3' мөчлөгт монофосфатын завсрын бодисоор дамжин 3' фосфоржуулсан бүтээгдэхүүн үүсгэдэг. Энэ нь давсны өндөр концентрацитай нэг судалтай РНХ-ийн өвөрмөц шинж чанартай боловч бага NaCl концентрацитай (0.3M NaCl-ээс бага) РНХ-ДНХ-ийн эрлийз дэх давхар судалтай РНХ болон РНХ-ийг задлах боломжтой.
Брюс Меррифелд анх энэ ферментийг нэгтгэсэн. RNase A нь молекулын судалгаанд маш алдартай фермент юм. Үхрийн нойр булчирхайн RNase A нь RNase A-ийн жишээ юм. Энэ нь лабораторид ашиглагддаг хамгийн хатуу ферментүүдийн нэг юм. Энэ ферментийн үйл ажиллагаанд кофактор хэрэггүй. Энэ бол өндөр температурт тэсвэртэй фермент юм. RNase A нь амин хүчлийн зөв дарааллыг илрүүлсэн эхний фермент ба гурав дахь уураг юм. Энэ фермент нь маш жижиг бөгөөд 124 амин хүчил, 12600да молекул масстай. Мөн энэ нь дөрвөн гистидиний үлдэгдэлтэй (Түүний 12 ба Түүний 119 нь катализаторын урвалд оролцдог).
Зураг 01: RNase A
RNase A-ийг түүхий дээжийг буцалгах замаар тусгаарлаж болно. Буцлах үед бусад бүх ферментүүд үлдсэн RNase A-г задалдаг. RNase A нь гайхалтай тогтвортой фермент юм. Энэ фермент нь рибонуклеаза дарангуйлагч уураг, хүнд металл, уридин ванадатын нэгдлийг дарангуйлдаг.
RNase H гэж юу вэ?
RNase H нь РНХ-ДНХ-ийн эрлийз дэх РНХ-ийг гидролизийн урвалаар задалдаг өвөрмөц бус рибонуклеаза фермент юм. RNase H нь РНХ-ДНХ-ийн эрлийз дэх РНХ-ийн 3'- O-P холбоог тасалдаг. Эцсийн эцэст энэ нь 3'OH ба 5' фосфаттай эцсийн бүтээгдэхүүн үйлдвэрлэдэг. ДНХ-ийн репликацийн хувьд энэ нь ДНХ-ийн шинэ хэлхээ үүссэний дараа РНХ праймерыг арилгах гол үүрэг гүйцэтгэдэг. Лабораторийн нөхцөлд энэ нь РНХ-ДНХ-ийн эрлийз дэх РНХ-ийг задалдаг боловч ДНХ болон эрлийзжээгүй РНХ-ийг задалдаг. Мөн энэ ферментийг ихэвчлэн cDNA синтезийн явцад анхны нэмэлт ДНХ хэлхээ үүссэний дараа РНХ-ийн загварыг устгахад ашигладаг.
Зураг 02: RNase H
RNase H нь мөн нуклеазын хамгаалалтын шинжилгээнд ашигладаг. Үүнийг мРНХ-ээс поли А сүүлийг арилгахад ашиглаж болно. RNase H нь эсийн дотор болон гадна талын кодчилдоггүй РНХ-г устгах чадвартай. Металлын ионууд нь энэ уургийн үйл ажиллагаанд кофакторууд болдог. RNase H ферментийг дарангуйлахад хелатор (EDTA) ашиглаж болно.
RNASE A болон RNASE H хоёрын ижил төстэй зүйл юу вэ?
- Хоёулаа уураг байдаг.
- Хоёулаа эндорибонуклеаза
- Хоёулаа РНХ-г доройтуулж болно.
- Хоёулаа гидролизийн урвал явуулдаг.
- Молекулын лабораториуд эдгээрийг хоёуланг нь ашигладаг.
RNASE A болон RNASE H хоёрын ялгаа юу вэ?
RNASE A vs RNASE H |
|
| RNase A нь нойр булчирхайн рибонуклеаза бөгөөд нэг судалтай РНХ-ийн хосгүй цитозин ба урацилийн үлдэгдлийг давсны өндөр концентрацид тусгайлан задалдаг нойр булчирхайн рибонуклеаз юм. | RNase H нь гидролизийн урвалаар РНХ-ДНХ-ийн эрлийз дэх РНХ-г задалдаг өвөрмөц бус рибонуклеаза фермент юм. |
| РНХ задрах шинж чанар | |
| RNase A нь давсны өндөр концентрацид тусгайлан нэг судалтай РНХ-г задалдаг. | RNase H нь РНХ-ДНХ-ийн эрлийз дэх РНХ-г задалдаг. |
| Үйл ажиллагаанд нөлөөлөх хүчин зүйлсийн хэрэгцээ | |
| RNase A-д үйл ажиллагаанд нь кофактор хэрэггүй. | RNase H нь үйл ажиллагаанд нь кофактор болгон металлын ион хэрэгтэй. |
| Уургийн идэвхжилийг дарангуйлагч | |
| Рибонуклеаза дарангуйлагч уураг, хүнд металл болон уридин ванадатын цогцолборууд нь РНХ-ийн А-ийн үйл ажиллагааг дарангуйлдаг. | Хелатор (EDTA) нь RNase H-ийн идэвхийг саатуулдаг. |
| ДНХ хуулбарлах дахь РНХ праймерыг арилгах | |
| RNase A нь ДНХ-ийн репликацид РНХ праймерыг арилгахад ашиглагддаггүй. | RNase H нь ДНХ-ийн репликаци дахь РНХ праймерыг арилгахад ашиглагддаг |
| Нэмэлт ДНХ (С-ДНХ)-ийн синтез дэх ДНХ-ийн загварыг арилгах | |
| RNase A нь нэмэлт ДНХ (С-ДНХ) синтезийн үед РНХ-ийн загварыг арилгахад ашиглагддаггүй. | RNase H нь нэмэлт ДНХ (С-ДНХ) синтезийн үед РНХ-ийн загварыг арилгахад ашиглагддаг. |
| Олиго (dt) болгон эрлийзжүүлсэн мРНХ дахь поли-А-сүүлийг арилгах | |
| RNase A нь олиго (dt) болж эрлийзжсэн мРНХ-ийн "поли-А сүүл"-ийг арилгахад ашиглагддаггүй. | RNase H нь олиго (dt) болж эрлийзжсэн мРНХ дахь "поли-А сүүл"-ийг арилгахад ашиглагддаг |
Хураангуй – RNASE A ба RNASE H
Рибонуклеазууд нь РНХ-ийг жижиг хэсгүүдэд хуваах чадвартай нуклеазын ферментүүд юм. Тэд хоёр төрөлтэй; эндорибонуклеаз ба эксорибонуклеазууд. Эндорибонуклеаза нь нэг судалтай эсвэл хоёр судалтай РНХ-ийг задлах чадвартай эндонуклеаз юм. Мөн энэ нь РНХ полинуклеотидын гинжин хэлхээний фосфодиэфирийн холбоог тасалдаг. RNase A ба RNase H нь хоёр эндорибонуклеаз юм. RNase A нь нойр булчирхайн рибонуклеаза бөгөөд нэг судалтай РНХ-ийн 3' төгсгөл дэх хосгүй цитозин ба урацилийн үлдэгдлийг давсны өндөр концентрацитай тусгайлан задалдаг. RNase H нь РНХ-ДНХ-ийн эрлийз дэх РНХ-ийг гидролизийн урвалаар задалдаг өвөрмөц бус рибонуклеаза фермент юм. Энэ нь RNase A ба RNase H хоёрын ялгаа юм.
RNASE A ба RNASE H PDF файлыг татаж авах
Та энэ нийтлэлийн PDF хувилбарыг татаж аваад офлайн зорилгоор ашиглах боломжтой. PDF хувилбарыг эндээс татаж авна уу RNASE A ба RNASE H хоорондын ялгаа
