Үндсэн ялгаа – SDS хуудас ба Western Blot
Вестерн blotting нь уургийн дээжээс тодорхой уураг илрүүлэх арга юм. Энэ техникийг гель электрофорез, улавчлах, эрлийзжүүлэх хэд хэдэн үндсэн үе шатуудаар гүйцэтгэдэг. Натрийн додецил сульфатын полиакриламидын гель электрофорез (SDS хуудас) нь уурагуудыг хэмжээ (молекулын жин) -ээр нь ялгахад ашигладаг гель электрофорезийн нэг төрлийн арга юм. Western blot нь SDS хуудасны уургийн ижил хэв маягийг шилжүүлэхэд ашигладаг, хатаах мембраны тусгай хуудас юм. SDS Page болон western blot хоёрын гол ялгаа нь SDS Page нь холимог дахь уургийг ялгах боломжийг олгодог бол western blot нь хольцоос тодорхой уургийг илрүүлэх, тоо хэмжээг тодорхойлох боломжийг олгодог. Аль аль нь уургийн шинжилгээний судалгаанд хэрэгтэй.
SDS хуудас гэж юу вэ?
SDS Page нь уураг ялгахад ашигладаг гель электрофорезийн арга юм. Үүнийг биохими, генетик, криминалистик, молекул биологи зэрэгт ихэвчлэн ашигладаг. Уургийг дээжээс гаргаж авсны дараа тэдгээрийг SDS болон полиакриламидаас бүрдсэн гель дээр ажиллуулдаг. SDS нь уургийг шугаман болгох (уураг денатурат) болон тэдгээрийн молекул масстай пропорциональ шугаман уургуудад сөрөг цэнэг өгөхөд ашигладаг анион угаалгын нунтаг юм. Полиакриламид нь гельний хатуу дэмжлэг болдог. Сөрөг цэнэгтэй денатурат уургууд нь гельээр дамжин аппаратын эерэг төгсгөл рүү шилждэг. Уургийн хэмжээнээс хамааран шилжих хурд нь уургуудын хооронд харилцан адилгүй бөгөөд ялгаралт үүсдэг. Тиймээс SDS хуудас нь бие даасан уургуудыг хэмжээгээр нь ялгахад хэрэгтэй.
Уургийн фракцид зориулсан полиакриламидын гель бэлтгэх нь SDS хуудасны чухал алхам юм. Полиакриламидын зөв концентраци ба ашигласан хөндлөн холбогч бодисын төрөл нь гельний физик шинж чанарт хүчтэй нөлөөлдөг бөгөөд энэ нь янз бүрийн уургийг бодитоор ялгахад хүргэдэг. Үр дүнтэй салгахын тулд гельний нүх сүвний хэмжээг зөв зохицуулах ёстой. Гэсэн хэдий ч SDS Page нь өндөр нарийвчлалтай уураг ялгах арга гэж тооцогддог.
SDS Page техник нь уургийн шинжилгээнд томоохон хязгаарлалттай байдаг. SDS нь уурагуудыг салгахаас өмнө денатурат болгодог тул ферментийн идэвхжил, уураг холбох харилцан үйлчлэл, уургийн кофактор гэх мэтийг илрүүлэхийг зөвшөөрдөггүй.
Зураг 01: SDS хуудас
Вестерн Блот гэж юу вэ?
Вестерн blotting техник нь уургийн хольцоос тодорхой уураг илрүүлэх, уургийн тоо хэмжээ, молекул жинг хэмжих боломжийг олгодог. Western blot нь SDS-полиакриламидын гель дэх уургийн хэв маягийн толин тусгал дүрсийг авахын тулд цэвэрлэх явцад ашигладаг мембран юм. Баруун blotting-д ашигладаг мембран нь нитроцеллюлоз эсвэл поливинилиден дифторид (PVDF) -ээс бүрддэг. Шилжүүлсэн уураг бүхий мембраныг хүссэн уургийг тодорхойлоход ашиглаж болно. Эрлийзжүүлэх замаар хүссэн уургийг илрүүлэхийн тулд өндөр чанарын эсрэгбие шаардлагатай. Эсрэгбие нь өөрийн өвөрмөц эсрэгтөрөгчтэй холбогдож, уураг болох хүссэн антиген байгаа эсэхийг харуулдаг.
SDS полиакриламидын гельээс уургийг western blot руу шилжүүлэх ажлыг электроблотын аргаар гүйцэтгэдэг. Энэ нь уураг нь гельээс электрофорез болж, нитроцеллюлозын мембран (баруун толбо) руу шилжих үр дүнтэй бөгөөд хурдан арга юм.
Зураг 02: Western Blot
SDS Page болон Western Blot хоёрын ялгаа юу вэ?
SDS Page vs Western Blot |
|
| SDS Page нь гель электрофорезийн арга юм. | Вестерн blot нь хольцоос тодорхой уураг илрүүлэхийн тулд мембран дээр хийдэг арга юм. |
| Ашиглах | |
| SDS хуудас нь уураг хэмжээг хэмжээгээр нь ялгах боломжийг олгодог. | Western blot нь SDS хуудасны гель дээрх уургийг хэв маягийг нь өөрчлөхгүйгээр шилжүүлэх, тусгай эсрэгбиетэй эрлийзжүүлэх боломжийг олгодог. |
| Сул тал | |
| Уургийн денатураци, өндөр өртөгтэй, нейротоксин химийн бодис агуулагддаг нь энэ аргын сул тал юм. | Энэ техник нь цаг хугацаа их шаарддаг бөгөөд сайн туршлагатай хувийн болон тусгай хяналттай нөхцөл шаарддаг. |
Хураангуй – SDS хуудас болон Western Blot
SDS хуудас болон western blot нь уургийн шинжилгээнд оролцдог хоёр арга юм. SDS хуудас нь уурагуудыг молекулын жингийн дагуу гель дээр хялбархан ялгах боломжийг олгодог. Western blot нь өвөрмөц эсрэгбиемүүдийг эрлийзжүүлэх замаар тодорхой уураг байгаа эсэх, тоо хэмжээг батлахад тусалдаг. Энэ бол SDS хуудас болон western blot хоёрын ялгаа юм.
