Үндсэн ялгаа – SDS хуудас ба эх хуудас
SDS болон эх хуудас нь молекул биологид хэрэглэгддэг хоёр төрлийн полиакриламид гель электрофорезийн арга юм. SDS Page болон Native Page хоёрын гол ялгаа нь ашигласан полиакриламидын гель юм. SDS хуудсанд денатурат гель ашигладаг тул молекулуудыг молекулын жингээс нь хамааруулан ялгадаг. Үүний эсрэгээр, Native Page-д денатуржуулдаггүй гель хэрэглэдэг. Тиймээс молекулуудыг хэмжээ, цэнэг, хэлбэрээс нь хамааруулан ялгадаг.
Полиакриламидын гель Электрофорез (хуудас) нь акриламидын мономеруудыг метилен бисакриламидаар полимержүүлэн хийсэн гель ашигладаг. Полиакриламид нь агарозоос илүү хатуу бөгөөд халуунд тэсвэртэй байдаг. Полиакриламидын гель нь жижиг нүх сүвтэй тул уургийг үр дүнтэй ялгах боломжийг олгодог. Хуудасны тохиргооны үндсэн хоёр төрөл байдаг: SDS Page болон Native Page. SDS хуудас эсвэл натрийн-додецил сульфат полиакриламидын гель электрофорез нь уургийг молекулын жинд үндэслэн ялгадаг. SDS хуудсанд денатурат гель ашигладаг. Native Page нь денатуратгүй гель ашигладаг бөгөөд уурагуудыг хэмжээ, цэнэг болон хэлбэрт нь (3D конформаци) үндэслэн ялгадаг.
SDS хуудас гэж юу вэ?
SDS хуудас нь уургийг молекулын жингээр нь ялгахад ашигладаг хамгийн түгээмэл электрофорезийн арга юм. Уг гель нь угаалгын нунтаг болох SDS (Sodium dodecyl sulfate) нэмсэнээр хийгдсэн. SDS хиймэл шүд нь уурагуудыг мономер болгон хувиргадаг. SDS нь анионик угаалгын нунтаг юм. Тиймээс энэ нь өргөн хүрээний рН-ийн хүрээнд уурагуудад цэвэр сөрөг цэнэгийг нэмдэг. Уургийн молекулуудад цэвэр сөрөг цэнэг өгөхөд цэнэгийн хэлбэлзлээс болж нарийн төвөгтэй бүтэц задарч байна. Сөрөг цэнэгийн улмаас уураг эерэг төгсгөл рүү татдаг. Тиймээс бага молекул жинтэй молекулууд гель матриц дээр илүү хурдан хөдөлж, анодын ойролцоо ажиглагддаг бол өндөр молекул жинтэй уургууд нь нүхэнд ойрхон ажиглагддаг.
Зураг 01: SDS хуудас
СДС-ийн полипептидийн гинжин холбоо нь түүний харьцангуй молекул масстай пропорциональ байна. Тиймээс молекулын массыг SDS хуудасны тусламжтайгаар тодорхойлж болно. SDS Page гелийг бромофенолын хөх будгаар будна. SDS хуудасны хэрэглээ нь харьцангуй молекулын массыг тооцоолох, уургийн хольц дахь уургийн харьцангуй элбэг байдлыг тодорхойлоход ашиглаж болохуйц өргөн хүрээтэй байдаг. SDS хуудас нь уургийн холимог дахь уургийн тархалтыг тодорхойлоход ашиглаж болно. SDS хуудас нь уураг цэвэршүүлэх, үнэлэхэд ашиглагддаг. Энэ нь вестерн blotting болон эрлийзжүүлэлтийн урьдчилсан процедур болгон ашигладаг бөгөөд энэ нь эргээд уургийн зураглал, тодорхойлоход ашиглагддаг.
Үндсэн хуудас гэж юу вэ?
Уугуул Полиакриламидын гель электрофорез (Native Page) нь денатуратгүй гель ашигладаг. Тиймээс гель матрицад SDS эсвэл бусад денатурат бодис нэмдэггүй. Native Page-д уургийг ялгах нь уургийн цэнэг, хэмжээ дээр суурилдаг. Тиймээс уургийн хөдөлгөөн нь уургийн цэнэг болон хэмжээнээс хамаарна.
Уургийн цэнэг нь амин хүчлүүдийн хажуугийн хэлхээнээс хамаарна. Хажуугийн гинж нь сөрөг цэнэгтэй бол уураг нь ерөнхийдөө сөрөг цэнэг хүлээн авах ба эсрэгээр. Уургууд нь эвхэгддэг тул 3D хэлбэрийг хадгалж байдаг. Эвхэх нь дисульфидын холбоо, гидрофобик харилцан үйлчлэл, устөрөгчийн холбоо зэрэг уургийн хэд хэдэн төрлийн холбооноос үүсдэг. Тиймээс хэрэв эх хуудас нь төвийг сахисан рН-д аваачвал уургийн молекул хэлбэрийн дагуу уургууд нь хуваагдана. Тиймээс Native Page-ийг уургийн цэнэгийн өөрчлөлт эсвэл зохицолыг илрүүлэх мэдрэмтгий арга болгон ашиглаж болно.
Үндсэн Page-ийн гол давуу тал нь Пэйжийн шинжилгээнд ашигласан уураг үйл явцын явцад эвдэрч гэмтдэггүй тул хуудасны шинжилгээнд ашигласан уургийг анхны байдалд нь оруулах боломжтой байдаг. Native Page нь харьцангуй өндөр дамжуулалтын техник бөгөөд уургийн тогтвортой байдал нэмэгддэг.
Зураг 02: Эх хуудас
Гель ажиллуулж дууссаны дараа Native Page гелийг бромофенолын цэнхэр эсвэл бусад тохиромжтой будагч бодисоор будаж харж болно. Native Page-ийн хэрэглээнд хүний рекомбинант эритропоэтин зэрэг гликопротейн зэрэг хүчиллэг уургийг ялгах, эсвэл үхрийн ийлдэс альбумин (BSA) -д агуулагдах уургийг тодорхойлох зэрэг орно.
SDS хуудас болон эх хуудасны хооронд ямар төстэй зүйл байдаг вэ?
- SDS Page болон Native Page систем хоёулаа полиакриламид гелийг гелийн матриц болгон ашигладаг.
- Хоёуланг нь уураг ялгах, тодорхойлоход ашигладаг.
- Хоёулаа нэгдлүүдийг салгахын тулд электрофорезийн хөдөлгөөнийг ашигладаг.
- Хоёуланг нь босоо болон хэвтээ байдлаар хийж болно (ихэвчлэн гүйлтийн урт нь илүү байдаг тул босоо хуудасны тохиргоо хэлбэрээр хийдэг).
- Гель сав, сам, цахилгаан хангамжийг багтаасан электрофорезын аппарат нь хоёр техникийг ажиллуулахад шаардлагатай.
- Гельний дүрслэлийг хоёр техникт будах аргаар хийж болно.
SDS хуудас болон эх хуудас хоёрын ялгаа юу вэ?
SDS хуудас ба эх хуудас |
|
| SDS хуудас эсвэл натрийн-додецил сульфат хуудас нь уурагуудыг молекул жинд нь хамааруулан ялгадаг бөгөөд энэ нь денатурат гель ашигладаг. | Native Page нь денатуратгүй гель ашигладаг бөгөөд уурагуудыг хэмжээ, цэнэг болон хэлбэрт нь (3D конформаци) үндэслэн ялгадаг. |
| Гельний төрөл | |
| SDS-хуудас дээр денатурат гель ашигласан. | Үндсэн хуудсанд денатуратгүй гель ашигласан. |
| SDS байгаа | |
| SDS нь SDS хуудсан дээрх дээжинд сөрөг цэнэг үүсгэх угаалгын нунтаг хэлбэрээр байдаг. | SDS үндсэн хуудсанд байхгүй байна. |
| Тусгаарлах үндэс | |
| Уургийг ялгах нь SDS хуудсан дээрх уургийн молекул жингээс хамаарна. | Салах нь үндсэн хуудасны уургийн молекулын хэмжээ, хэлбэрээс хамаарна. |
| Уургийн тогтвортой байдал | |
| Уургийн тогтвортой байдал SDS хуудсанд бага байна. | Уургийн тогтвортой байдал нь үндсэн хуудсанд өндөр байна. |
| Уургийг сэргээх | |
| Энэ нь SDS хуудсан дээр денатуратлагдсан тул боломжгүй. | Үндсэн хуудсан дээр боломжтой. |
Хураангуй – SDS хуудас ба эх хуудас
SDS Page болон Native Page нь уургийг ялгахад ашигладаг хоёр төрлийн Полиакриламид гель электрофорезийн арга юм. SDS Page нь SDS хэмээх угаалгын нунтагаар эмчилдэг. SDS нь уургийн нийт сөрөг цэнэгийг өгдөг бөгөөд энэ нь уургийн денатурацид хүргэдэг. Тиймээс уурагуудыг молекулын жингээр нь ялгадаг. Үүний эсрэгээр, Native Page техник нь ямар ч денатурат бодис хэрэглэдэггүй. Тиймээс уургууд нь хэмжээ эсвэл хэлбэрээс хамаарч тусгаарлагддаг. Энэ бол SDS хуудас болон эх хуудасны хоорондох ялгаа юм.
