Үндсэн ялгаа – Гель электрофорез ба SDS хуудас
Гель электрофорез нь цахилгаан талбарт макромолекулуудыг ялгах арга юм. Энэ нь ДНХ, РНХ, уургийг холимогоос молекулын хэмжээгээр нь ялгах молекул биологийн нийтлэг арга юм. SDS хуудас нь уургийн хольцоос уураг ялгахад ашигладаг гель электрофорезийн нэг төрөл юм. Гель электрофорез гэдэг нь ДНХ, РНХ, уураг ялгахад хэрэглэдэг ердийн техникийг хэлдэг нэр томъёо бөгөөд SDS Page нь гель электрофорезийн нэг төрөл юм. Энэ бол гель электрофорез ба SDS хуудасны гол ялгаа юм.
Гель электрофорез гэж юу вэ?
Гель электрофорез нь ДНХ, РНХ, уураг гэх мэт цэнэгтэй молекулуудыг тэдгээрийн хольцоос ялгах лабораторид хэрэглэгддэг түгээмэл арга юм. Гель электрофорез хийхэд гель хэрэглэдэг. Энэ нь молекул шигшүүрээр ажилладаг. Гель электрофорезид агароз ба полиакриламид гэсэн хоёр төрлийн гель хэрэглэдэг. Гель электрофорезын тусламжтайгаар молекулуудыг сайн салгахын тулд гельний нүх сүвний хэмжээг сайтар хянаж байх ёстой тул гель болон гель бэлдмэлийг сонгох нь гель электрофорезын үед анхаарах чухал хүчин зүйл юм. Гель электрофорез нь гельний хоёр төгсгөлд холбогдсон цахилгаан оронтой байдаг. Гельний нэг үзүүр нь эерэг цэнэгтэй байхад нөгөө үзүүр нь сөрөг цэнэгтэй байна.
ДНХ ба РНХ нь сөрөг цэнэгтэй молекулууд юм. Тэдгээрийг гелийн сөрөг төгсгөлөөс гель рүү ачаалж, цахилгаан талбарт хэрэглэсний дараа гельний нүх сүвээр дамжин гелийн эерэг цэнэгтэй төгсгөл рүү шилжинэ. Шилжилтийн хурд нь молекулын цэнэг болон хэмжээнээс хамаарна. Жижиг молекулууд том молекулуудаас илүү гельний нүхээр амархан шилжинэ. Тиймээс жижиг молекулууд гельээр хол зайд, том молекулууд богино зайд явдаг. Гель дээрх молекулуудын хөдөлгөөнийг ажиглахын тулд тусгай төрлийн будагч бодис хэрэглэдэг. Цахилгаан орон нь тодорхой хугацаанд үйлчилж, молекулыг алдахаас сэргийлж, молекулуудыг хөдөлсөн байрлалд нь байлгахын тулд зогсдог. Гельд янз бүрийн тууз ажиглагдаж болно. Эдгээр туузууд нь янз бүрийн хэмжээтэй молекулуудыг төлөөлдөг. Тиймээс гель электрофорез нь молекулуудыг хэмжээгээр нь ялгахад тустай.
Гель электрофорез нь ПГУ, RFLP, клончлох, ДНХ-ийн дараалал тогтоох, өмнөд blotting, геномын зураглал гэх мэт молекул биологийн бэлтгэлийн арга болгон янз бүрийн арга техникт нэгтгэгддэг.
Зураг 01: Агароз гель электрофорез
SDS хуудас гэж юу вэ?
Натрийн додецил сульфат полиакриламидын гель электрофорез (SDS Page) нь уураг ялгахад ашигладаг гель электрофорезийн нэг төрөл юм. Уургийг ялгахад гель электрофорез хэрэглэх үед уураг нь ДНХ, РНХ шиг сөрөг цэнэггүй, эерэг эсвэл сөрөг төгсгөл рүү шилждэггүй тул тусгай эмчилгээ шаардлагатай. Тиймээс гель электрофорез хийхээс өмнө уураг нь денатурат болж, сөрөг цэнэгээр бүрхэгдсэн байдаг. Үүнийг натрийн додецил сульфат (SDS) гэж нэрлэдэг угаалгын нунтаг ашиглан хийдэг. Дэмжих орчинд SDS болон полиакриламид гель ашигладаг гель электрофорезыг SDS хуудас гэж нэрлэдэг. Энэ аргыг биохими, генетик, криминалистик, молекул биологи зэрэгт ихэвчлэн ашигладаг.
SDS Page-ийн үеэр уурагуудыг SDS-тэй хольдог. SDS нь уурагуудыг шугаман хэлбэрт оруулж, молекулын масстай нь пропорциональ сөрөг цэнэгээр бүрхдэг. Сөрөг цэнэгийн улмаас уургийн молекулууд гельний эерэг цэнэгийн төгсгөл рүү шилжиж, молекулын массын дагуу хуваагддаг. SDS хуудсанд полиакриламидыг гельний хатуу тулгуур болгон ашигладаг. Уургийн бодит салалт нь гельний шинж чанараас ихээхэн хамаардаг. Тиймээс полиакриламидын гель бэлтгэх ажлыг сайтар хийж, полиакриламидын зөв концентрацийг ашиглах хэрэгтэй. Полиакриламидын гель нь агароз гельтэй харьцуулахад өндөр нарийвчлалтай байдаг. Тиймээс SDS хуудас нь уураг ялгах өндөр нарийвчлалтай техник гэж тооцогддог.
SDS хуудас нь денатуржуулагч гель электрофорезийн нэг төрөл юм. Энэ нь уургийн шинжилгээнд томоохон хязгаарлалттай байдаг. SDS нь уурагуудыг салгахаас өмнө денатурат болгодог тул ферментийн идэвхжил, уураг холбох харилцан үйлчлэл, уургийн кофактор гэх мэтийг илрүүлэхийг зөвшөөрдөггүй.
Зураг 02: SDS хуудас
Гель электрофорез ба SDS хуудасны ялгаа нь юу вэ?
Гель электрофорез ба SDS хуудас |
|
| Гель электрофорез нь цахилгаан орон ашиглан макромолекулуудыг салгах арга юм. | SDS Page нь уурагуудыг массаар нь ялгахад ашигладаг өндөр нарийвчлалтай гель электрофорезын арга юм. |
| Gel Run | |
| Үүнийг хэвтээ болон босоо байдлаар гүйцэтгэх боломжтой. | SDS хуудас үргэлж босоо байдлаар ажилладаг. |
| Салах үндэс | |
| Цэнэг болон хэмжээнээс хамаарч салгах болно. | Уургийн ялгарал нь масс ба цэнэгийн дагуу явагддаг. |
| Тогтоол | |
| Агароз гель электрофорез нь бага нарийвчлалтай, полиакриламид гель электрофорез нь илүү өндөр нарийвчлалтай | SDS хуудас илүү сайн нягтаршилтай. |
| Денатураци | |
| Гель электрофорез нь денатурат болон денатуратгүй аргуудыг агуулдаг. | SDS хуудас нь уурагуудыг салгахаас өмнө денатурат болгодог. |
Товч мэдээлэл – Гель электрофорез ба SDS хуудас
Гель электрофорез нь ДНХ, РНХ, уурагуудыг хэмжээ, цэнэгээс нь хамааруулан ялгах, шинжлэхэд ашигладаг түгээмэл арга юм. Гель электрофорезын хоёр үндсэн төрөл байдаг: агароз гель электрофорез ба полиакриламид гель электрофорез. Агароз гель нь нуклейн хүчлийг ялгахад голчлон ашиглагддаг; өндөр нарийвчлалтай байх шаардлагатай бол полиакриламидын гель ашигладаг. SDS хуудас нь уургийн нарийн төвөгтэй хольцыг ялгахад өргөн хэрэглэгддэг гель электрофорезийн нэг төрөл юм. Энэ нь өндөр нарийвчлалтай уураг ялгах техник гэж тооцогддог. Энэ бол гель электрофорез ба SDS хуудасны хоорондох ялгаа юм.
