Кленов болон Т4 ДНХ полимераза хоёрын гол ялгаа нь Кленовын фрагмент нь E. coli ДНХ полимераза 1-ийн том хэсэг, харин Т4 ДНХ полимераз нь бактериофагийн T4-ийн ДНХ полимераза 1 юм.
ДНХ полимеразууд нь урьд өмнө нь байгаа праймерын 3′-OH төгсгөлд дезоксирибонуклеотид нэмж ДНХ үүсэхийг хурдасгадаг ферментүүд юм. Төрөл бүрийн ДНХ полимеразууд байдаг. Молекул биологид хэрэглэгддэг ихэнх ДНХ полимеразууд нь прокариот ДНХ полимеразууд юм. Кленовын фрагмент ба Т4 ДНХ полимераз нь прокариот гаралтай хоёр төрлийн ДНХ полимераз юм. Кленовын хэлтэрхий нь E.-ийн задралаас үүссэн том фрагмент юм.coli ДНХ полимераза 1-ийг бактерийн протеаза субтилизинээр хоёр хэсэг болгон хуваана. T4 ДНХ полимераз нь бактериофаг T4-ийн ДНХ полимераз 1 юм. Klenow болон T4 ДНХ полимераза хоёулаа 5′→3′ полимераз ба 3′→5′ экзонуклеазын идэвхжилтэй. Тэд хоёуланд нь 5′→3′ экзонуклеазын идэвхгүй тул молекул биологийн олон хэрэглээнд илүү тохиромжтой.
Klenow гэж юу вэ?
Кленовын фрагмент нь молекул биологид хэрэгтэй ДНХ полимераз юм. E. coli ДНХ полимераз 1 нь бактерийн протеаз, субтилизинээр уураг задлах задралд ороход хоёр хэлтэрхий үүсдэг: нэг нь том хэсэг, нөгөө нь жижиг фрагмент юм. Кленовын хэлтэрхий нь 68 кДа хэмжээтэй том фрагмент юм. Кленовын фрагмент нь ДНХ Пол I-ийн 5′→3′ полимераз ба 3′→5′ экзонуклеазын (засвар унших) үйл ажиллагаатай. Кленовын фрагментийн 3′→5′ экзонуклеазын идэвхжил нь полимержилтын явцад буруу нэмсэн суурийг арилгахад тусалдаг. Кленовын фрагмент нь 5′→3′ экзонуклеазын идэвхжил агуулаагүй бөгөөд энэ нь бүрэн хэмжээний буюу бүрэн бүтэн Е.coli ДНХ полимераза 1. Зөвхөн полимержих үйл ажиллагаа дангаараа шаардлагатай үед давуу талтай. Кленовын хэлтэрхийнүүд нь 5'-ийн хэт их хэсгийг дүүргэх, зондуудын синтез, ДНХ-ийн дараалал, хоёр хэлхээтэй ДНХ-ийн нийлэгжилт, cDNA-ийн хоёр дахь хэлхээний нийлэгжилт, сайт руу чиглэсэн мутагенез хийхэд ашиглагддаг.
Зураг 01: Кленовын фрагмент
Зарим хэрэглээнд Кленовын фрагментийн 3′→5′ экзонуклеазын идэвхжил нь мөн хүсээгүй болдог. Үүнийг Кленовын фрагментийг кодлодог генийн мутацийг нэвтрүүлснээр устгаж болно. Үүссэн Кленовын фрагментийг экзо-Кленовын хэлтэрхий гэж нэрлэдэг. Иймд экзо-Кленовын фрагмент нь коли полимераза 1-ийн зөвхөн 5′→3′ полимеразын идэвхжилтэй.
Т4 ДНХ Полимераз гэж юу вэ?
T4 ДНХ полимераз нь ДНХ-ийн нийлэгжилтийг хурдасгадаг ДНХ полимераз юм. Энэ нь T4 бактериофагаар кодлогдсон уураг юм. Бүтцийн хувьд T4 ДНХ полимераз нь 898 амин хүчлийн үлдэгдэл уураг (молекул жин 103.6 кДа). Синтезийг хурдасгахын тулд загвар болон праймер шаардлагатай.
Зураг 02: Т4 ДНХ Полимераз
Кленовын фрагменттэй адил Т4 ДНХ полимераз нь 5′→3′ полимераз ба 3′→5′ экзонуклеазын идэвхжилтэй. Түүнээс гадна 5′→3′ экзонуклеазын идэвхгүй. Т4 ДНХ полимераз нь ДНХ-ийн хэсгүүдийн 5′-цухуйсан үзүүрийг дүүргэхэд тустай. Энэ нь ихэвчлэн давхар судалтай ДНХ-ийн 5′-төгсгөл эсвэл 3′-төгсгөлд хэрэглэгддэг. T4 ДНХ полимеразыг мохоо клонд ихэвчлэн ашигладаг. T4 ДНХ полимеразын 3′→5′ экзонуклеазын (засвар унших) идэвхжил нь Кленовын фрагментээс илүү хүчтэй (200 дахин) юм. Хамгийн чухал нь T4 ДНХ полимераз нь өндөр процесс (секундэд 400 нуклеотид) байдаг.
Кленов ба Т4 ДНХ Полимеразын хооронд ямар төстэй зүйл байдаг вэ?
- Кленов ба Т4 ДНХ полимеразууд нь хоёр прокариот полимеразууд юм.
- Хоёр полимераз нь 5′→3′ полимераз ба 3′→5′ экзонуклеазын идэвхжилтэй.
- Тэд 5′→3′ экзонуклеазын идэвхжил үзүүлдэггүй.
- Хоёр ферментэд ДНХ-ийн нийлэгжилтийг хурдасгахын тулд загвар болон праймер шаардлагатай.
- Эдгээр ферментийг 75 хэмд халуунаар идэвхгүйжүүлэх боломжтой 0
Кленов ба Т4 ДНХ полимеразын ялгаа нь юу вэ?
Кленов ба Т4 ДНХ полимеразын гол ялгаа нь фермент бүрийн гарал үүсэлтэй байдаг. Кленовын хэлтэрхий нь нянгаас гаралтай бол T4 ДНХ полимераза нь вирус болох бактериофагаас гаралтай. T4 ДНХ полимераз нь Кленовын фрагментээс өндөр боловсруулалттай байдаг. Түүгээр ч зогсохгүй T4 ДНХ полимераз нь Кленовын хэлтэрхийтэй харьцуулахад хүчтэй унших чадвартай байдаг. Тиймээс энэ нь Klenow болон T4 ДНХ полимераза хоёрын өөр нэг ялгаа юм.
Доорх мэдээллийн графикт Klenow болон T4 ДНХ полимеразын хоорондын ялгааг хүснэгт хэлбэрээр харуулав.
Хураангуй – Klenow vs T4 ДНХ Полимераза
Кленоу фрагмент нь E. coli ДНХ полимераза 1-ийн том фрагмент юм. Энэ нь зөвхөн 5′→3′ полимераз ба 3′→5′ экзонуклеазын идэвхжилтэй. Энэ нь бүрэн бүтэн E. coli ДНХ pol 1-ийн 5′→3′ экзонуклеазын идэвхгүй байдаг. Тиймээс Кленовын фрагмент нь бактерийн полимераз юм. Нөгөөтэйгүүр, T4 ДНХ полимераз нь T4 бактериофагаар кодлогдсон полимераз юм. Кленовын фрагменттэй адил энэ нь 5′→3′ полимераз ба 3′→5′ экзонуклеазын идэвхийг хоёуланг нь агуулдаг ба 5′→3′ экзонуклеазын идэвхгүй. Гэсэн хэдий ч T4 ДНХ полимераз нь Кленовын хэлтэрхийтэй харьцуулахад өндөр боловсруулалттай, унших чадвар өндөртэй байдаг. Тэгэхээр энэ нь Klenow болон T4 ДНХ полимераза хоёрын гол ялгаа юм.
