Үндсэн ялгаа – Проб ба Праймер
Молекулын датчик нь ДНХ эсвэл РНХ-ийн нэмэлт дарааллыг таньж, зорилтот дарааллыг тодорхойлох боломжийг олгодог жижиг ДНХ эсвэл РНХ-ийн фрагмент юм. Праймер нь ДНХ-ийн синтезийн эхлэлийн цэг болох ДНХ эсвэл РНХ-ийн жижиг хэсэг юм. Праймер ба зондууд нь загвар ДНХ эсвэл зорилтот ДНХ-ийн нэмэлт нуклеотидуудтай эрлийзждэг. Гэсэн хэдий ч датчик ба праймер хоёрын гол ялгаа нь ДНХ-ийн хуулбарлахад праймер шаардлагатай байдаг бол зонд нь дээжийн ДНХ-ийн тодорхой дарааллыг илрүүлэхэд шаардлагатай байдаг.
Зонд гэж юу вэ?
Зонд нь ДНХ эсвэл РНХ-ийн жижиг хэлтэрхий юм. Тэдгээрийг молекул маркер гэж нэрлэдэг. Сорьцын урт нь янз бүр байж болно (100-аас 1000 суурь), датчикийн нуклеотидууд нь зорилтот дарааллын хэсэгт нэмэлт юм. Илрүүлэхэд хялбар болгох үүднээс датчикуудыг цацраг идэвхт изотопоор эсвэл флюресцент будаг эсвэл эсрэгбиемээр тэмдэглэсэн байдаг. Зорилтот дарааллын нэмэлт суурьтай холбогдож, сорьцонд зорилтот ДНХ эсвэл РНХ байгаа эсэхийг харуулдаг. Сорьцуудыг шошголох хоёр үндсэн арга байдаг: төгсгөлийн шошгололт ба хоч орчуулга. Пробуудыг ДНХ датчик, РНХ датчик, cDNa мэдрэгч, синтетик олигонуклеотидын датчик зэрэг төрөлд ангилдаг бөгөөд өөр өөр техник ашиглан бэлтгэдэг.
Зонд нь вирус судлал, шүүх эмнэлэг, эцэг тогтоох шинжилгээ, ДНХ-ийн хурууны хээ, удамшлын өвчин илрүүлэх, RFLP, молекул цитогенетик, in situ эрлийзжүүлэлт гэх мэт бичил биетэн, молекулын олон салбарт чухал хэрэгсэл юм.
Зураг 01: Флюресцентээр тэмдэглэсэн датчик нь FISH-д эмгэг төрүүлэгчийг илрүүлэхэд ашигладаг
Праймер гэж юу вэ?
Праймер нь ДНХ эсвэл РНХ-ийн богино фрагмент бөгөөд ДНХ-ийн нийлэгжилтийг эхлүүлэгч болдог. ДНХ полимеразын фермент нь праймерын 3' OH бүлэгт нуклеотид нэмж, ДНХ-ийн загварт нэмэлт шинэ хэлхээг нэгтгэдэг. Праймерууд нь 18-20 нуклеотидын урттай маш богино фрагментууд юм. Тэдгээрийг in vitro ДНХ олшруулах (ПГУ) зорилгоор лабораторид химийн аргаар нийлэгжүүлдэг. Праймерууд нь хэрэглэгч өөрөө зохион бүтээсэн тул нуклеотидын ямар ч дараалалтай байж болно. Тэдгээр нь загвар ДНХ-ийн нэмэлт суурьтай нийцүүлэн нийлэгждэг. Тиймээс энэ нь нуклеотидын ямар ч дараалалтай байж болно. ДНХ-ийн полимераз нь урьд өмнө байгаа ДНХ-ийн хэсэггүйгээр шинэ ДНХ-ийг нэгтгэж чадахгүй тул праймерууд ДНХ-ийн репликацийн хувьд маш чухал юм. ПГУ-ын праймерыг зохион бүтээхдээ дараах зүйлсийг анхаарах хэрэгтэй:
- Праймерууд нь олшруулахыг хүссэн ДНХ-ийн хажуугийн төгсгөлд нэмэлт нуклеотид агуулсан байх ёстой.
- Праймер хайлах температур 55 – 65 хооронд байх ёстой 0C
- G болон C агуулга 50-60% байх ёстой.
Хоёр праймерыг ПГУ-д ДНХ-ийн дээжийн хоёр хэлхээг хуулбарлахын тулд урагш болон урвуу байдлаар ашигладаг. Праймеруудыг ихэвчлэн ПГУ болон ДНХ-ийн дараалал тогтооход ашигладаг.
Зураг 02: ПГУ-д праймерын боловсруулалт
Probe болон Primer хоёрын ялгаа нь юу вэ?
Probe vs Primer |
|
| Зонд нь молекулын эрлийзжүүлэлтийн аргаар дээжинд зорилтот дараалал байгаа эсэхийг илрүүлэхэд ашигладаг ДНХ/РНХ-ийн жижиг хэсэг юм. | Праймер нь ДНХ эсвэл РНХ-ийн жижиг хэсэг бөгөөд ДНХ-ийн хуулбарлах эхлэлийн цэг болдог. |
| Функц | |
| Энэ нь ДНХ эсвэл РНХ-ийн дээжинд тодорхой дараалал байгааг илрүүлдэг. | Энэ нь ДНХ-ийн синтезийн эхлэлийн цэг болдог. |
| Урт | |
| Урт нь 100 – 1000 суурийн мужид байж болно | Урт нь ерөнхийдөө 18-20 суурьтай байна |
| Нэмэлт дараалалтай холбох | |
| Зорь нь зорилтот дарааллын нэмэлт суурьтай эрлийзждэг | Праймер нь ДНХ-ийн хэлхээний нэмэлт сууриудтай нэгддэг. |
| Шошгололт | |
| Сондонуудыг илрүүлэхэд хялбар болгох үүднээс шошготой байна | Праймерыг ерөнхийдөө шошгодоггүй |
| ПГУ-д ашиглах | |
| Пробуудыг ПГУ-д ашигладаггүй | Праймеруудыг ПГУ-д ашигладаг |
Хураангуй – Пробе vs Primer
Зонд нь дээж дэх зорилтот дарааллыг илрүүлэхийн тулд нэмэлт нуклеотидуудтай эрлийзжүүлж болох ДНХ эсвэл РНХ-ийн дарааллын жижиг фрагмент юм. Зорилтот дараалал байгаа эсэхийг харахын тулд датчикуудыг цацраг идэвхт, дархлаа судлалын эсвэл флюресцентээр тэмдэглэсэн байна. Праймер нь маш жижиг ДНХ эсвэл РНХ-ийн фрагмент бөгөөд in vitro ДНХ олшрох эхлэлийн цэг болдог. ДНХ полимераз нь 3' OH бүлгийн праймерыг тодорхойлж, загварт нэмэлт шинэ хэлхээ үүсэхийг эхлүүлдэг. Проб ба праймерууд нь нэмэлт нуклеотидуудтай эрлийзжсэнээр ижил төстэй ажилладаг. Тиймээс датчик ба праймер хоёрын гол ялгаа нь тэдний үндсэн функц юм.
