Гол ялгаа – Нитроцеллюлоз ба PVDF
Western blotting нь уургийн дээжээс тодорхой уургийг илрүүлэх, тоо хэмжээг тогтоох боломжийг олгодог арга юм. Техникийн найдвартай байдал нь гельээс уураг шингээх мембраныг зөв сонгохоос хамаарна. Төрөл бүрийн бичил сүвэрхэг мембран байдаг. Нитроцеллюлоз ба PVDF мембран нь бусад төрлийн мембранаас онцгой шинж чанараараа судлаачдын илүүд үздэг хоёр мембран юм. Нитроцеллюлоз эсвэл PVDF-ийн хоорондох сонголт нь барууны blotting-ийн өөр нэг сорилт юм. Нитроцеллюлоз ба PVDF хоёулаа уураг шингээх чадвар өндөртэй байдаг. Нитроцеллюлоз ба PVDF мембраны гол ялгаа нь нитроцеллюлозын мембран нь эсрэгбиеийг тайлж, мембраныг эсрэгбиеийг устгахад дахин ашиглах чадваргүй байдаг бол PVDF мембран нь хуулж, дахин ашиглах чадвартай байдаг.
Нитроцеллюлоз гэж юу вэ?
Нитроцеллюлоз нь целлюлозыг азотын хүчлээр боловсруулах замаар үйлдвэрлэсэн полимер бөгөөд молекул биологи, ялангуяа өмнөд, хойд, барууны blotting гэх мэт арчилгааны техникт бичил сүвэрхэг мембран хийхэд ашиглагддаг. Нитроцеллюлозын мембраны нүхний хэмжээ 3-аас 20 микрон хооронд хэлбэлздэг. Нитроцеллюлозын бичил сүвэрхэг мембран нь мембраны гадаргуу дээр тохиолддог иммунохимийн урвалыг илрүүлэхэд тусалдаг. Тиймээс нитроцеллюлозын мембраныг ихэвчлэн уургийг хөдөлгөөнгүй болгох, баруун blotting-д тусгай уураг илрүүлэхэд ашигладаг. Нитроцеллюлозын мембран нь гликопротейн болон нуклейн хүчлийг хөдөлгөөнгүй болгож чаддаг.
Нитроцеллюлозын мембраныг хэд хэдэн онцлогоос шалтгаалан хажуугийн урсгалын шинжилгээнд илүүд үздэг. Нитроцеллюлозын мембран нь уургийг өндөр концентрацитай шингээдэг. Мембраныг чийгшүүлэхэд ашигладаг уусгагч нь нитроцеллюлозын мембраны уургийн шингээлтийг бууруулдаггүй. Нитроцеллюлозын мембраныг хүссэн гелийн хэмжээгээр хялбархан багасгаж, цахилгаан эсвэл хялгасан судасны дамжуулалтаар гельээс уурагуудыг мембран руу шилжүүлдэг. Нитроцеллюлоз нь өндөр холбох чадвартай мембранаар уургийн урсгалыг хурдасгадаг. Нитроцеллюлоз нь харьцах чадварыг сайжруулдаг. Нитроцеллюлозын мембраны өөр нэг онцлог шинж чанар нь уусгагчгүй усанд тэсвэртэй цавуугаар янз бүрийн хуванцар дэвсгэр дээр хялбархан нааж болно.
Зураг 01: Баруун blotting-д зориулсан нитроцеллюлозын мембран
PVDF гэж юу вэ?
Поливинилиден дифторид (PVDF) нь винилиден дифторидын полимержилтоор үүсгэгддэг фторполимер бөгөөд уургийг хөдөлгөөнгүй болгох өндөр чадвартай. Тиймээс PVDF-ээр хийсэн бичил сүвэрхэг мембраныг уургийн холимогоос тодорхой уургийг шинжлэхийн тулд western blotting техникт ашигладаг. PVDF мембраныг мөн амин хүчлийн шинжилгээ, уургийн дараалалд ашиглаж болно. Нитроцеллюлозын мембран дээрх PVDF мембраны хамгийн чухал шинж чанар нь эсрэгбиемүүдийг хялбархан салгаж, дараагийн эсрэгбиеийн шинжилгээнд дахин ашиглах боломжтой юм.
PVDF мембран нь нитроцеллюлозын мембранаас илүү зузаан; Тиймээс дахин ашиглах явцад эвдрэлд илүү тэсвэртэй. PVDF мембран нь өндөр гидрофобик шинж чанартай байдаг. Тиймээс тэдгээрийг хэрэглэхийн өмнө метанол эсвэл изопропанолд дэвтээсэн байх ёстой.
Нитроцеллюлоз ба PVDF хоёрын ялгаа юу вэ?
Нитроцеллюлоз ба PVDF |
|
| Нитроцеллюлоз нь целлюлозоос тогтсон полимер юм. | PVDF нь винилиден дифторидын полимержилтоор үйлдвэрлэсэн фторполимер юм. |
| Мембраны нүхний хэмжээ | |
| Нүхний ердийн хэмжээ нь 0.1, 0.2 эсвэл 0.45μ | Нүхний ердийн хэмжээ нь 0.1, 0.2 эсвэл 0.45μm |
| Уураг холбох чадвар | |
| Нитроцеллюлоз нь 80-100 мкг/см-ийн уураг холбох чадвартай2. | PVDF нь уураг холбох чадвар нь 170-200 мкг/см2. |
| Мэдрэмж | |
| Энэ нь PVDF-тэй харьцуулахад мэдрэг чанар багатай. | Энэ нь өндөр мэдрэмжтэй. |
| Бага хэмжээгээр илэрхийлэгддэг уураг илрүүлэх | |
| Нитроцеллюлозын мембраны мэдрэмтгий чанар бага тул бага хэмжээгээр илэрхийлэгддэг уураг илрүүлэхэд тохиромжгүй. | Энэ нь өндөр мэдрэмжтэй тул бага хэмжээгээр илэрхийлэгддэг уураг илрүүлэхэд илүү тохиромжтой. |
| Арын чимээ | |
| Энэ нь арын чимээ багатай | Энэ нь арын дуу чимээ ихтэй. |
| Уурагтай харилцан үйлчлэл | |
| Уургийн молекулууд нь гидрофобик харилцан үйлчлэлээр нитроцеллюлозын мембрантай холбогддог. | Уураг нь гидрофобик болон диполь харилцан үйлчлэлээр PVDF мембрантай холбогддог. |
| Мембраны мөн чанар | |
| Нитроцеллюлоз нь хэврэг, хэврэг. Гэсэн хэдий ч нитроцеллюлозын хувилбарууд байдаг бөгөөд тэдгээр нь тэсвэртэй. | PVDF илүү бат бөх, химийн өндөр эсэргүүцэлтэй. |
| Хуулбарлах, дахин ашиглах чадвар | |
| Нитроцеллюлоз нь дохиог алдалгүйгээр хуулж, дахин шалгахад бэрхшээлтэй байж болзошгүй. | PVDF нь программуудыг дахин шалгах, дараалал тогтооход тохиромжтой. |
| Тохиромжтой | |
| Нитроцеллюлоз нь бага молекул жинтэй уураг илрүүлэхэд тохиромжтой. | PVDF нь өндөр молекул жинтэй уураг илрүүлэхэд илүү тохиромжтой. |
| Бусад хэрэглээ | |
| Нитроцеллюлозыг нуклейн хүчлийн шинжилгээ болон цэг/слот арилгахад ашиглаж болно. | PVDF-ийг уургийн дараалал болон хатуу фазын шинжилгээний системд ашиглаж болно. |
| Зардал | |
| Энэ нь PVDF мембранаас хямд. | Энэ нь нитроцеллюлозын мембранаас илүү үнэтэй. |
| Урьдчилан чийгшүүлэх шаардлагатай | |
| Нитроцеллюлозын мембраныг метанолоор урьдчилан дэвтээх шаардлагагүй | PVDF мембраныг метанолоор урьдчилан дэвтээнэ. |
Тойм – Нитроцеллюлоз ба PVDF
Нитроцеллюлозын мембран нь хажуугийн урсгалын шинжилгээнд арилжааны зорилгоор ашигласан анхны мембранууд юм. Тэд уураг шингээх өндөр чадвартай. Тиймээс нитроцеллюлозын мембраныг western blotting-д ашигладаг. PVDF нь western blotting-д хэрэглэгддэг өөр төрлийн мембран бөгөөд уураг шингээх чадвар өндөртэй байдаг. Энэ хоёр төрлийг уургийн шинжилгээнд зориулж western blotting-д ашигладаг. Гэсэн хэдий ч PVDF мембран нь илүү онцгой шинж чанартай байдаг тул тэдгээрийг нитроцеллюлозын мембранаас илүү тохиромжтой болгодог. Гэхдээ нитроцеллюлозын мембран нь бага молекул жинтэй уураг илрүүлэхэд илүү тохиромжтой, PVDF мембран нь өндөр молекул жинтэй уураг илрүүлэхэд илүү тохиромжтой. Энэ бол нитроцеллюлоз болон PVDF мембрануудын ялгаа юм.
