Санамсаргүй праймер ба олиго dT-ийн гол ялгаа нь санамсаргүй праймер нь бүх боломжит гексамер олигонуклеотидын дарааллын холимог байдаг бол олиго dT праймер нь 12-18 дезокситимидины нэг судалтай суналтаас бүрддэг.
Урвуу транскрипци нь мРНХ эсвэл ямар ч төрлийн РНХ ашиглан cDNA-г нэгтгэх механизм юм. cDNA үүсгэхийн тулд урвуу транскриптаза фермент болон бусад шаардлагатай бүрэлдэхүүн хэсгүүд, ялангуяа загвар болон праймеруудыг хангах ёстой. Праймерууд нь зорилтот дарааллыг олшруулахад тусгайлан зориулсан богино ДНХ-ийн дараалал юм. Санамсаргүй праймер ба олиго dT праймер нь урвуу транскрипцид ашиглагддаг нийтлэг хоёр төрлийн праймер юм. Иймд санамсаргүй праймер буюу олиго dT праймер нь урвуу транскриптазыг эхлүүлэхийн тулд урвуу транскриптазад шаардлагатай богино ДНХ олигонуклеотидын дараалал юм. РНХ-ийн загвараас хамааран эдгээр хоёр төрлийн праймераас тохирох праймерыг сонгож болно.
Санамсаргүй праймер гэж юу вэ?
Санамсаргүй праймер нь бүх боломжит гексамер дарааллыг төлөөлдөг олигонуклеотидын холимог юм. Санамсаргүй праймерын праймер дараалал нь 5´ – d (NNNNNN) –3´ N=G, A, T эсвэл C. Иймд санамсаргүй праймеруудыг нэг хэлхээтэй ДНХ эсвэл РНХ-ийг ДНХ полимераз эсвэл урвуу транскриптазагаар олшруулахад ашиглаж болно. тус тус. Үүнээс гадна санамсаргүй праймер хольц нь РНХ-ийн бүх хэсгийг олшруулж, cDNA үүсгэх чадвартай. Тиймээс энэ нь янз бүрийн урттай cDNA үүсгэдэг.
Зураг 01: Санамсаргүй праймер
Хамгийн чухал нь санамсаргүй праймерын хольц нь загварын өвөрмөц байдлыг харуулдаггүй. Энэ нь мРНХ болон бусад РНХ-ийн төрлийг ялгах чадваргүй. Мөн энэ нь дээжинд байгаа ямар ч төрлийн РНХ-тэй хавсардаг. Гэхдээ санамсаргүй праймер хольц нь рРНХ, тРНХ, кодчилдоггүй РНХ, жижиг РНХ, прокариот мРНХ гэх мэт поли(А) сүүлгүй РНХ-ийг урвуу хуулбарлахад тохиромжтой.
Oligo dT гэж юу вэ?
Oligo dT праймер нь 12 – 18 дезокситимин (dT)-аас бүрддэг. Праймерын дарааллыг 5´-d (TTT TTT TTT TTT TTT TTT)-3 хэлбэрээр илэрхийлж болно. Энэ нь поли(А) сүүл агуулсан мРНХ-ээс cDNA үйлдвэрлэхэд ашиглагддаг. Үндсэндээ энэ нь урвуу транскриптазын катализаторын урвалын праймерын үүрэг гүйцэтгэдэг. Урвуу транскрипцийн үед олиго dT праймер нь ихэнх эукариот мРНХ-ийн 3´ төгсгөлд байрлах поли-аденилжсэн сүүлтэй болж, процессыг эхлүүлнэ.
Зураг 02: Oligo dT Primer ашиглан урвуу транскрипц
Санамсаргүй праймераас ялгаатай нь олиго dT праймер нь прокариот РНХ ба микроРНХ зэрэг поли(А) сүүлгүй задарсан РНХ эсвэл РНХ-д тохиромжгүй.
Санамсаргүй праймер болон Олиго dT хоёрын ижил төстэй зүйл юу вэ?
- Санамсаргүй праймер ба олиго dT праймер нь урвуу транскрипц болон cDNA хийхэд хэрэглэгддэг хоёр төрлийн праймер юм.
- Санамсаргүй праймер болон олиго dT праймерыг хамтад нь ашиглах нь cDNA синтезийн мэдрэмжийг нэмэгдүүлдэг.
- Эдгээр нь нэг судалтай богино нуклеотидын дараалал юм.
Санамсаргүй праймер ба Олиго dT хоёрын ялгаа юу вэ?
Санамсаргүй праймер нь санамсаргүй дарааллаас тогтсон богино олигонуклеотидын дараалал юм. Үүний зэрэгцээ, олиго dT праймер нь 12-18 дезокситимидинээс бүрдсэн богино судал юм. Энэ бол санамсаргүй праймер ба олиго dT хоёрын гол ялгаа юм. Санамсаргүй праймерын дараалал нь 5´ – d (NNNNNN) –3´ N=G, A, T эсвэл C. Харин олиго dT праймерын дараалал 5´-d (TTT TTT TTT TTT TTT TTT)-3´ байна.. Тиймээс бид үүнийг санамсаргүй праймер болон олиго dT хоёрын өөр нэг ялгаа гэж үзэж болно.
Түүгээр ч зогсохгүй санамсаргүй праймер нь загварын өвөрмөц байдлыг харуулдаггүй бөгөөд ямар ч төрлийн РНХ-тэй холбогддог бол олиго dT праймер нь эукариот мРНХ-ийн поли(A) сүүлний өвөрмөц байдлыг харуулдаг.
Доорх инфографик нь санамсаргүй праймер болон олиго dT хоёрын ялгааг нэгтгэн харуулав.
Хураангуй – Санамсаргүй праймер ба Олиго dT
Санамсаргүй праймер ба олиго dT праймер нь cDNA синтезд ашиглагддаг хоёр төрлийн праймер юм. Санамсаргүй праймер нь бүх боломжит гексамерын дарааллыг төлөөлдөг олигонуклеотидын холимогоос бүрддэг бол олиго dT праймер нь 12-18 дезокситимидины нэг судалтай дараалал юм. Энэ бол санамсаргүй праймер ба олиго dT хоёрын гол ялгаа юм. Нэмж дурдахад, олиго dT праймерууд нь поли(А) сүүлтэй РНХ-ийн урвуу транскрипцийг бүрэн хэмжээгээр хийхэд тустай байдаг бол санамсаргүй праймерууд нь ихэнх РНХ-ийн төрөл зүйлийн урвуу транскрипцид, тухайлбал задарсан РНХ, поли(А) сүүлгүй РНХ, РНХ агуулсан РНХ зэрэгт хэрэгтэй байдаг. хоёрдогч бүтэц. Иймээс санамсаргүй праймер нь загварын өвөрмөц байдлыг харуулахгүй бол олиго dT праймер нь поли(A) сүүл агуулсан эукариот мРНХ-ийн өвөрмөц байдлыг харуулдаг.
