Coomassie болон мөнгөн будгийн гол ялгаа нь coomassie будалт нь coomassie гялалзсан цэнхэр өнгийн будгийг ашигладаг уураг будах арга, харин гулсуур будалт нь мөнгөн толбо ашигладаг уураг будах арга юм.
Уураг ялгах, тодорхойлох нь протеомын шинжилгээний чухал алхам юм. Тэд гель электрофорезийн дараа өндөр нарийвчлалтай уургийн шинж чанарыг тодорхойлох шаардлагатай. Анион будагч бодис (commassie brilliant blue), металлын катион (имидазол-цайры), мөнгөн толбо, флюресцент будаг гэх мэт янз бүрийн будгийг багтаасан олон тооны будах арга байдаг. Заримдаа цацраг идэвхт мэдрэгч ашиглаж болно. Будах аргыг сонгох нь энгийн байдал, лабораторид дүрслэх төхөөрөмж байгаа эсэх зэргээс шалтгаална.
Coomassie будалт гэж юу вэ?
Coomassie будалт нь коомассийн гялалзсан хөх будгийг ашигладаг уураг будах арга юм. Үүнийг ерөнхийдөө coomassie blue техник гэж нэрлэдэг. Coomassie brilliant blue бол хамгийн алдартай анионик уургийн будаг юм. Энэ толбо нь дунд зэргийн мэдрэмжтэй, тоон шугаман чанар сайтай бараг бүх уураг буддаг. Coomassie гялалзсан цэнхэр толбо нь бараг бүх уурагтай өвөрмөц бус холбогддог. R-250 ба G-250 гэсэн хоёр өөр төрлийн гялалзсан хөх будгийн хувилбарууд байдаг. R-250 нь будах хугацааг богиносгодог бол G-250 нь илүү мэдрэмтгий, байгаль орчинд ээлтэй найрлагатай.
Зураг 01: Coomassie будалт
Coomassie будагч бодис нь масс спектрометрийн судалгаа болон уураг тодорхойлох судалгаанд маш их алдартай. Үүнээс гадна био аюулгүй coomassie толбо нь одоогоор зах зээлд худалдаалагдаж байгаа coomassie blue G-250-ийн хоргүй найрлага юм. Энэ найрлагын давуу тал нь угаах, цэвэрлэхэд зөвхөн ус шаарддаг. Био аюулгүй coomassie толбо нь ердийн coomassie blue G-250-тэй тэнцэх мэдрэмжтэй боловч R-250 coomassie толбоноос илүү мэдрэмжтэй байдаг. Цаашилбал, энэ нь ердийн Coomassie blue G-250-аас илүү хялбар бөгөөд хурдан будах протоколтой. Coomassie цэнхэр будгийн сул тал нь мөнгөн будалттай харьцуулахад мэдрэмж багатай байдаг. Coomassie цэнхэр будалт нь мөнгөн будалтаас ойролцоогоор 50 дахин бага мэдрэмжтэй байдаг. Гэсэн хэдий ч, холбоход хялбар байдаг тул олон судалгаанд үүнийг илүүд үздэг.
Мөнгөн будалт гэж юу вэ?
Мөнгөн будалт нь мөнгөн толбо ашигладаг уураг будах арга юм. Мөнгөний будгийг агароз болон полиакриламидын гель хоёуланг нь будахад ашигладаг. Агароз гель дэх уургийн мөнгөн будгийг анх 1973 онд Керени, Галляс нар боловсруулсан. Дараа нь үүнийг SDS-PAGE-д ашигладаг полиакриламидын гель дэх уурагуудад тохируулсан. Одоогийн байдлаар мөнгөн будгийг ДНХ эсвэл РНХ будахад ашигладаг. Гельд толбо үүсгэхийн тулд гельийг энэ аргаар мөнгөний нитратын уусмалаар өсгөвөрлөнө. Мөнгөн будалт нь уураг агуулагдах газрыг бороос хар хүртэл будна.
Зураг 02: Мөнгөн будалт
Мөнгөний будгийн эрч хүч нь уургийн анхдагч бүтцээс хамаарна. Түүнчлэн ашигласан савны цэвэр байдал, урвалжуудын цэвэр байдал нь мөнгөний будгийн чанарт нөлөөлдөг. Гэсэн хэдий ч мөнгөн будгийн сул тал нь бүх уураг, ялангуяа гликопротейн болон хажуугийн гинжин хэлхээнд нь өөрчилсөн том бүлэгтэй уургуудыг илрүүлэх боломжгүй байдаг.
Кумасси болон мөнгөн будгийн хооронд ямар төстэй зүйл байдаг вэ?
- Coomassie болон мөнгөн будалт нь уураг будахад ашигладаг хоёр арга юм.
- Тэд уураг болон ДНХ-г хоёуланг нь будаж болно.
- Будах арга хоёулаа сул талтай.
- Эдгээр техник нь засах, будах, арилгах зэрэг ижил төстэй алхмуудтай.
Кумасси болон мөнгөн будгийн хооронд ямар ялгаа байдаг вэ?
Coomassie будалт нь коомассийн гялалзсан цэнхэр өнгийн будгаар уураг будах арга бөгөөд гулсуур будалт нь мөнгөн толбо ашигладаг уураг будах арга юм. Тиймээс энэ нь Coomassie болон мөнгөн будгийн хоорондох гол ялгаа юм. Цаашилбал, Coomassie будалт нь мөнгөн будалтаас бага мэдрэмжтэй байдаг.
Доорх инфографик дээр Coomassie болон мөнгөн будгийн хоорондох ялгааг зэрэгцүүлэн харьцуулахын тулд хүснэгт хэлбэрээр жагсаасан болно.
Тогтоон – Coomassie vs Silver Staining
Уургийг дүрслэн харуулахын тулд уургийн өвөрмөц будаг холбох эсвэл өнгө үүсгэх химийн урвалыг хийж болно. Үүнийг уургийн будалт гэж нэрлэдэг. Coomassie болон мөнгөн будалт нь уураг будахад ашигладаг хоёр арга юм. Coomassie будгийн техник нь coomassie гялалзсан цэнхэр өнгийн толбыг ашигладаг бол гулсуур будгийн хувьд мөнгөн толбыг ашигладаг. Энэ бол Coomassie болон мөнгөн будгийн хоорондох гол ялгаа юм.
