Гол ялгаа – AFLP ба RFLP
ДНХ-ийн судалгаа нь филогенетик харилцааг ойлгох, тодорхойлох, удамшлын өвчнийг оношлох, организмын геномыг зураглахад асар их ач холбогдолтой. ДНХ-ийн шинжилгээтэй холбоотой хэд хэдэн аргыг мөн тодорхойгүй ДНХ-ийн сан дахь тодорхой ген эсвэл ДНХ-ийн дарааллыг тодорхойлоход ашигладаг. Тэдгээрийг молекул маркер гэж нэрлэдэг. Олшруулсан фрагментийн уртын полиморфизм (AFLP) болон хязгаарлалтын фрагментийн уртын полиморфизм (RFLP) нь организм хоорондын генетикийн өөрчлөлтийг илрүүлэх зорилгоор молекул биологид боловсруулсан ийм хоёр молекул маркер (арга) юм. Хоёр арга нь адилхан чухал бөгөөд давуу болон сул талуудтай. AFLP ба RFLP хоёрын гол ялгаа нь AFLP нь задалсан ДНХ-ийн сонгомол ПГУ-ын олшруулалтыг агуулдаг бол RFLP нь ДНХ-ийн хэсгүүдийн сонгомол ПГУ-ын олшруулалтыг агуулдаггүй.
AFLP гэж юу вэ?
AFLP (Ampplified Fragment Length Polymorphism) нь молекул биологийн чухал хэрэгсэл бөгөөд генетикийн өөрчлөлтийн шинжилгээнд өргөн хэрэглэгддэг. AFLP нь хуваагдмал геномын ДНХ-ийн ПГУ-ын тусгай олшруулалт, гель электрофорезоор авторадиографаар полиморфизмыг илрүүлэхэд суурилдаг. AFLP нь ургамал, амьтан, бактери, мөөгөнцөр зэрэг төрөл бүрийн хаант улсын омгийн генетикийн ялгааг тодорхойлоход ихээхэн хувь нэмэр оруулдаг. AFLP-ийг бага хэмжээний үл мэдэгдэх ДНХ-ийн дээжээр хийж болно. Энэ нь датчикуудын өмнөх дарааллын мэдлэг, дизайн шаарддаггүй.
AFLP-ийн алхамууд
- ДНХ-ийн тусгаарлалт
- Хязгаарлалтын эндонуклеаз бүхий ДНХ-ийн боловсруулалт
- Хязгаарлагдмал ДНХ-ийн хэсгүүдийг адаптераар холбох
- Хязгаарлалтын тусгай газар бүхий фрагментуудыг сонгон олшруулах
- ПГУ-ын бүтээгдэхүүнийг гель электрофорезээр ялгах
- Гель матрицыг авторадиографаар дүрслэх
AFLP нь ДНХ-ийн дарааллын талаар урьдчилан мэдлэггүйгээр мөөгөнцөр, бактери, ургамал, амьтан зэрэг хэд хэдэн таксоны ДНХ-ийн профайлыг тодорхойлоход ашиглаж болох илүү мэдрэмтгий бөгөөд дахин үржих боломжтой арга юм. Энэ нь маш мэдрэмтгий шинж чанартай тул популяци дахь хувь хүмүүсийн бага зэргийн ялгааг тодорхойлоход тусалдаг. AFLP нь геномын зураглал, шүүх эмнэлгийн судалгаа, эцэг эхийн шинжилгээ, генотип тогтоох зэрэгт чухал ач холбогдолтой.
Зураг 01: AFLP
RFLP гэж юу вэ?
Хязгаарлалтын фрагментийн урт полиморфизм (RFLPs) нь гомолог ДНХ-ийн дарааллын генетикийн өөрчлөлтийг илрүүлэхэд ашигладаг техник юм. Энэ бол ДНХ-ийн профайлыг тодорхойлох анхны арга юм. Организмд өвөрмөц ДНХ-ийн хурууны хээ эсвэл ДНХ-ийн профайл байдаг. Гомологийн дараалал нь тухайн организмд өвөрмөц байдаг өөр өөр хязгаарлалтын газруудтай (байршилтай) байдаг тул RFLP нь төрөл зүйлийн доторх эсвэл хоорондоо нягт холбоотой организмуудын ДНХ-ийн профайлын өөрчлөлтийг шинжлэх чухал хэрэгсэл болдог. Гомолог ДНХ-ийг тусгай хязгаарлалтын эндонуклеазуудаар задлахад хувь хүн бүрт өвөрмөц байдаг өөр өөр ДНХ-ийн профайлыг бий болгоно. Иймээс энэ аргын гол зорилго нь гомолог ДНХ-ийг тусгай хязгаарлах ферментээр хязгаарлаж, гель электрофорез, блтинг ашиглан фрагментийн уртын полиморфизмыг шинжлэх замаар организмын генетикийн өөрчлөлтийг илрүүлэх явдал юм. Blotting загвар нь организм бүрт өвөрмөц бөгөөд тодорхой генотипийг тодорхойлдог.
RFLP-ийн алхамууд
- Дээжээс хангалттай хэмжээний ДНХ тусгаарлах
- ДНХ-ийн дээжийг тусгай хязгаарлалтын эндонуклеазуудаар богино дараалалд хуваах
- Үүссэн хэсгүүдийг өөр өөр урттай агароз гель электрофорезоор салгах.
- Гель профайлыг Southern blotting-ээр мембран руу шилжүүлэх
- Мембраныг шошготой датчикаар эрлийзжүүлэх ба профайл тус бүрийн фрагментийн уртын полиморфизмын шинжилгээ
RFLP нь өвчний удамшлыг илрүүлэх, гэр бүлийн гишүүдийн дунд өвчлөх эрсдэлийг илрүүлэх маш чухал арга юм. RFLP нь геномын зураглал, шүүх эмнэлгийн гэмт хэрэгтнүүдийг тодорхойлох, эцэг тогтоох шинжилгээ гэх мэт ажилд ихэвчлэн ашиглагддаг. RFLP нь хэд хэдэн хязгаарлалттай байдаг. RFLP нь эрлийзжүүлэх датчикийг зохион бүтээхэд дарааллын өгөгдлийн талаархи урьдчилсан мэдлэгийг шаарддаг. Мөн шинжилгээ хийхэд хангалттай хэмжээний ДНХ-г дээжээс тусгаарлах шаардлагатай бөгөөд энэ нь шүүх эмнэлгийн судалгаанд хэцүү байдаг.
Зураг 01: RRFLP зураглал
AFLP болон RFLP хоёрын ялгаа нь юу вэ?
ALFP vs RFLP |
|
| AFLP нь задарсан ДНХ-ийн ПГУ-ын сонгомол олшруулалтыг агуулдаг. | RFLP нь ПГУ-аас бусад тохиолдолд ПГУ-д хамаарахгүй. |
| Дараалалын мэдлэг | |
| Өмнөх дарааллын мэдлэг шаардлагагүй. | Загвар зохион бүтээгдсэн RFLP датчикуудад дарааллын өмнөх мэдлэг шаардлагатай. |
| Найдвартай | |
| Энэ нь илүү найдвартай. | Энэ нь AFLP-тэй харьцуулахад найдвартай биш юм. |
| Полиморфизм илрүүлэх үр ашиг | |
| Энэ нь RFLP-ээс илүү полиморфизм илрүүлэх үр дүнтэй. | Энэ нь AFLP-тэй харьцуулахад үр ашиг багатай. |
| Зардал | |
| Энэ нь RFLP-тэй харьцуулахад бага зэрэг үнэтэй байна. | Энэ нь AFLP-тэй харьцуулахад хямд байна. |
| Програм | |
| AFLPs-ийг геномын зураглал, ДНХ-ийн хурууны хээ, генетикийн олон янз байдлын судалгаа, эцэг тогтоох шинжилгээ, шүүх шинжилгээнд ашигласан | RFLP шинжилгээ нь геномын зураглал, удамшлын эмгэгийн генийг нутагшуулах, өвчний эрсдэлийг тодорхойлох, эцэг тогтооход чухал хэрэгсэл юм. |
Хураангуй – AFLP ба RFLP
AFLP болон RFLP нь молекул биологийн олон янз байдлыг үнэлэх, генетикийн харилцааг үнэлэхэд генетикийн маркер болгон ашигладаг хоёр арга юм. AFLP нь RFLP-ээс илүү организм хоорондын генетикийн полиморфизмыг илрүүлэх үр дүнтэй, мэдрэмтгий арга болдог. Гэсэн хэдий ч эдгээр аргууд хоёулаа генетикийн өөрчлөлтийг илрүүлэхэд өөр өөр үр дүнтэй боловч ДНХ-ийн хурууны хээ болон өвчнийг оношлоход ашигладаг хэвээр байна.
