shRNA vs siRNA
РНХ-ийн интерференц (RNAi) үйл явцын явцад зорилтот генийн илэрхийлэл нь өндөр өвөрмөц, сонгомол байдлаар унадаг. RNAi нь байгалийн процесс бөгөөд үүнд жижиг хөндлөнгийн РНХ (siRNA) болон богино үсний хавчаар РНХ (shRNA) болон хоёр үйлдэлт shRNA орно. Одоогийн байдлаар RNAi нь хорт хавдрын хувийн эмчилгээний хэрэгсэл болгон өргөн хэрэглэгддэг. RNAi-ийн хэрэглээг үндсэндээ химийн аргаар нийлэгжүүлсэн хоёр судалтай siRNA ба вектор дээр суурилсан shRNA молекулуудаар хийдэг. Хэдийгээр эдгээр хоёр молекул нь ижил төстэй үйл ажиллагааны үр дүнтэй боловч тэдгээр нь бүтцийн хувьд ялгаатай; Иймээс эдгээр хоёр молекулын үйл ажиллагааны молекулын механизм, РНХ-ийн замууд, зорилтот бус нөлөөлөл нь бас ялгаатай.
shRNA
shRNA нь жижиг РНХ молекулын дараалал бөгөөд үсний хавчаарыг чанга эргүүлж, RNAi үед зорилтот генийн илэрхийлэлийг чимээгүй болгоход ашиглаж болно. ШРНХ-ийн илэрхийлэл нь вирус, бактери эсвэл плазмид дамжуулж болох векторын тусламжтайгаар хийгддэг. Эдгээр нь эсийн цөмд нийлэгжиж, цаашдын процессуудад зориулж цитоплазм руу зөөгддөг. Эдгээр молекулууд нь миРНХ-ийн төлөвших замтай төстэй; Тиймээс миРНХ-ийн нийлэгжилт нь shRNA-ийн нийлэгжилтийг ойлгох үндэс суурийг тавьсан юм. РНХ полимераз II эсвэл III аль нь ч РНХ полимераз II эсвэл III дэмжигчээр дамжуулан shRNA-г хуулбарлаж чаддаг. ShRNA-ийн хэрэглээний давуу тал нь тэдгээрийн доройтол, эргэлтийн түвшин харьцангуй бага байдаг. Сул тал нь илэрхийллийн вектор хэрэгтэй бөгөөд энэ нь аюулгүй байдлын зарим асуудал үүсгэж болзошгүй юм.
siRNA
siRNAs нь 20-25 хос үндсэн уртаас бүрдсэн хоёр хэлхээтэй РНХ молекулууд юм. Эдгээрийг RNAi зам дахь нэмэлт нуклеотидын дараалал бүхий аливаа генийг чимээгүй болгох замаар генийг дарангуйлахад ашигладаг.siRNA-г шилжүүлснээр генийг задлах нь түр зуурын нөлөөгөөр ихэвчлэн амжилтгүй байдаг; ялангуяа хурдан хуваагддаг эсүүдэд дарангуйлал удаан үргэлжилдэггүй. Энэ асуудлыг даван туулахын тулд богино үсний хавчаарыг оруулснаар siRNA-г өөрчилдөг. Энэхүү өөрчлөгдсөн молекулыг дараа нь shRNA гэж нэрлэдэг. shRNA-г хэвийн үйл ажиллагаагаа үргэлжлүүлэхийн тулд Dicer-ээр siRNA болгон хувиргах ёстой.
shRNA болон siRNA хоёрын ялгаа юу вэ?
• siRNA-аас ялгаатай нь shRNA нь нэмэлт үсний хавчаартай байдаг. shRNA нь siRNA-ийн өөрчлөгдсөн хувилбар юм.
• shRNA-д илэрхийлэх вектор шаардлагатай бол siRNA-д хэрэггүй.
• shRNA-г удаан хугацаагаар устгахад ашиглах боломжтой бол siRNA-г зөвхөн богино хугацааны генийг устгахад ашиглах боломжтой.
• siRNA-ийн генийн дарангуйллаас ялгаатай нь shRNA-ийн дарангуйлал нь удаан үргэлжилдэг бөгөөд хэрэв үүнийг тохирох вирусын вектороор оруулбал энэ нь генийн чимээгүй байдлын байнгын нөлөөг үүсгэж болзошгүй.
• Дикер нь shRNA-г siRNA молекул болгон хувиргаж, хэвийн үйл ажиллагаагаа явуулахад шаардлагатай.
