Өөрчлөлт ба шилжүүлэг
Хувиргах ба трансфекция нь гадны генийг эзэн эсэд нэвтрүүлэхэд ашигладаг хоёр энгийн арга юм. Гэхдээ эдгээр техник нь хост эсвэл вектор системийн төрлөөс хамаарна.
Эсийн хувиргалт гэж юу вэ?
Трансформаци нь мөөгөнцрийн болон бактерийн эсүүдэд генийг нэвтрүүлэхэд ашигладаг техник юм. Энэ техник нь ихэвчлэн генийн удамшлын өөрчлөлтийг үүсгэдэг тул генийн илэрхийлэл нь байнгын шинж чанартай байдаг. Бактерийн өөрчлөлтийг 1928 онд Фредерик Гриффит анх нэвтрүүлсэн. Дараа нь 1970-аад оны эхээр энэ аргыг Е.коли. E. coli-г хувиргах явцад эсийг CaCl2 -ийн мөс шиг хүйтэн уусмалд дэвтээнэ. Энэ алхам нь E.coli эсийг чадварлаг болгодог. Үүний дараа чадварлаг эсийг плазмидын ДНХ-тэй хольж, мөсөн дээр 20-30 минутын турш өсгөвөрлөнө. Дараа нь ДНХ-ийг эс рүү шилжүүлэхийн тулд богино дулааны цохилт өгнө. Эцэст нь эсийг шим тэжээлийн шөлөнд хийж, плазмидыг бий болгохын тулд 37 ° C-т 60-90 минутын турш өсгөвөрлөнө. Эдгээр алхмуудыг амжилттай гүйцэтгэсний дараа өөрчлөгдсөн эсүүдийг эсийг үржүүлэхэд тохиромжтой зөөвөрлөгч дээр байрлуулж болно. Хувиргах нь үр ашиггүй арга гэж тооцогддог тул үүнийг клон банк бэлтгэхэд ашиглах боломжгүй.
Эс шилжүүлэн суулгах гэж юу вэ?
Шилжүүлэн суулгах нь гадны генийг ихэвчлэн хөхтөн амьтдын эсэд нэвтрүүлэх арга юм. Шилжүүлэн суулгах хоёр арга байдаг; тухайлбал, түр зуурын трансфекци ба тогтвортой трансфекци. Түр зуурын шилжүүлгийн үед генийн илэрхийлэл хязгаарлагдмал хугацаанд боломжтой; Тиймээс генийн өөрчлөлт нь түр зуурын илэрхийлэл үүсгэдэг. Энэхүү шилжүүлэн суулгах арга нь энгийн бөгөөд хурдан байдаг; Тиймээс үүнийг тогтмол хэрэглэж болно. Түр зуурын дамжуулалтын нэг сул тал бол том хэмжээний уургийн синтезийн системд хэрэглэхэд бэрхшээлтэй байдаг.
Тогтвортой трансфекцийн үед зорилтот ген нь эзэн эсийн геномд нэгддэг тул түр зуурын трансфекциас ялгаатай нь генийн илэрхийлэл нь байнгын шинжтэй байдаг.
Хувиргах ба Трансфекция хоёр юугаараа ялгаатай вэ?
• Трансформаци гэдэг нь генийг прокариот эсэд (бактерийн болон мөөгөнцрийн) нэвтрүүлэхийг хэлдэг бол трансфекцийг ихэвчлэн хөхтөн амьтны эсэд ген нэвтрүүлэх гэж нэрлэдэг.
• Өөрчлөлтийн үр дүнд генийн удамшлын өөрчлөлт гардаг бол трансфекция нь генд түр зуурын илэрхийлэл эсвэл байнгын өөрчлөлтийг үүсгэдэг.
