Үндсэн ялгаа – Түр зуурын ба тогтвортой дамжуулалт
Трансфекци нь химийн болон физикийн аргаар эукариот эсийн генийг шилжүүлэх үйл явц юм. Трансфекцийг түр зуурын трансфекци ба тогтвортой трансфекци гэсэн үндсэн хоёр төрөлд ангилж болно. Түр зуурын трансфекцийн үед сонирхлын ген нь эзэн геномтой нэгдэж чадахгүй бөгөөд богино хугацаанд эзэн дотор түр зуур илэрхийлэгддэг бол тогтвортой трансфекцийн үед сонирхлын ген нь эзэн геномтой нэгдэж, хэдэн үе дамжин удаан хугацаанд хадгалагддаг.. Энэ бол түр зуурын болон тогтвортой трансфекцийн гол ялгаа юм. Аль ч тохиолдолд трансфекци амжилттай болж, генүүд илэрдэг.
Түр зуурын дамжуулалт гэж юу вэ?
Трансфекци нь эукариот эсүүдэд ген оруулах чухал хэрэгсэл юм. Трансфекцийн хоёр төрлөөс түр зуурын дамжуулалт нь ген шилжүүлэх нийтлэг арга юм. Вектороор дамжуулан гадны генүүд эзэн эс дотор өөрчлөгддөг. Гадны ДНХ эзэн эсэд орсны дараа түүнд хоёр сонголт бий. Энэ нь хостын геномтой нэгдэж, хуулбарлах эсвэл геномтой нэгдэхгүйгээр дотроо үлдэх боломжтой. Түр зуурын трансфекци нь эзэн геномд нэгдэхгүйгээр оруулсан генийн түр зуурын илэрхийлэлийг харуулдаг. Генүүд эс хуваагдах хүртэл кодлогдсон уургийг илэрхийлж, үйлдвэрлэдэг. Гэвч интеграцчлах чадваргүйн улмаас үржиж, хойч үедээ нэвтэрч чадахгүй байна. Энэ төрлийн шилжүүлэн суулгах нь богино хугацаанд амжилттай байдаг. Эсийн хуваагдлын явцад эсвэл бусад хүчин зүйлийн нөлөөгөөр гадны ДНХ задралд ордог. Гадны ДНХ нь өндөр ороомогтой ДНХ хэлбэртэй байх үед түр зуурын трансфекцийг харуулдаг.
Зураг 01: Түр зуурын шилжүүлэг
Тогтвортой трансфекци гэж юу вэ?
Тогтвортой трансфекци нь гадны генийг эзэн геномд амжилттай нэгтгэж байгааг харуулж байна. Гадны ДНХ эзэн эсийн дотор орсны дараа гадаад ДНХ-ийн нэг хэсэг нь эзэн геномтой нэгдэж, түүний нэг хэсэг болдог. Иймээс гадны ДНХ мөн хуулбарлаж, хойч үедээ эзэн геномыг хуулбарлах үед дамждаг. Энэ төрлийн трансфекци нь нарийн төвөгтэй бөгөөд ховор тохиолддог. Гэсэн хэдий ч геном руу тогтвортой шилждэг тул энэ шинж чанар нь хэд хэдэн үеийн туршид удаан хугацаанд хадгалагддаг.
Тогтвортой трансфекци нь хүнд хэцүү үйл явц бөгөөд ДНХ-г үр дүнтэй хүргэх, эсийг гадаад ДНХ-ийг геном руу нь олж авахыг шаарддаг. Иймээс шугаман ДНХ нь дугуй хэлбэртэй ДНХ-ээс илүү тогтвортой дамжуулалтыг дэмждэг. Гэсэн хэдий ч тогтвортой трансфекцын хурд нь ойролцоогоор 104 хувирсан эсэд нэг байдаг. Тогтвортой трансфекцийг сонгох боломжтой маркерын котрансфомаци болон зөөвөрлөгч дээр хиймэл сонголт хийх замаар ажиглаж болно.
Зураг 02: Тогтвортой шилжүүлэг
Түр зуурын болон тогтвортой шилжүүлгийн ялгаа нь юу вэ?
Түр зуурын ба тогтвортой дамжуулалт |
|
| Гадаадын ДНХ нь эзэн геномд нэгддэггүй. | Гадаадын ДНХ нь эзэн геномтой нэгдэж, түүний нэг хэсэг болдог. |
| Хост доторх хуулбар | |
| Түр дамжсан генүүд нь эзэн дотор үржихгүй. Тиймээс генүүд дараагийн үед дамждаггүй. | Генүүд нь эзэн дотор үржиж, хойч үедээ дамждаг. |
| Генийн илэрхийлэлийн үргэлжлэх хугацаа | |
| Генүүд хязгаарлагдмал хугацаанд илэрхийлэгдэж, дараа нь устаж үгүй болдог. | Генүүд нь геномын нэг хэсэг болж, удамшлын дотор удаан хугацаанд илэрхийлэгддэг. |
| Ашиглах | |
| Энэ нь ген эсвэл генийн бүтээгдэхүүний богино хугацааны илэрхийлэлд үзүүлэх нөлөөг судлахад хэрэгтэй. | Энэ нь генийн илэрхийллийн урт хугацааны үр нөлөөг судлахад хэрэгтэй. |
| Шилжүүлгийн илрүүлэлт | |
| Генүүд илэрхийлэгддэг бөгөөд сурвалжлагч генийг оруулснаар амархан илрүүлэх боломжтой. | Тогтвортой трансфекцийг сонгох боломжтой маркер оруулж, зөөвөрлөгч дээр зохиомлоор сонгох замаар амархан илрүүлж болно. |
| Илрэлт ба үйл явц | |
| Түр зуурын трансфекци нь нийтлэг бөгөөд гүйцэтгэхэд төвөгтэй биш юм. | Тогтвортой шилжүүлэн суулгах нь ховор тохиолддог бөгөөд хийхэд төвөгтэй байдаг. |
| ДНХ-ийн мөн чанар | |
| Өндөр ороомогтой ДНХ нь түр зуурын шилжүүлэн суулгахад тохиромжтой. | Шугаман ДНХ нь тогтвортой трансфекц хийхэд тохиромжтой. |
| Програмууд | |
| Үүнийг дарангуйлагч РНХ-аар генийг задлах, дуугүй болгох, бага хэмжээгээр уураг үйлдвэрлэх судалгаанд ашигладаг | Үүнийг том хэмжээний, урт хугацааны фармакологийн судалгаа, генийн эмчилгээ, урт хугацааны генетик зохицуулалтын механизмын судалгаанд уураг үйлдвэрлэхэд ашигладаг |
Хураангуй – Түр зуурын ба тогтвортой дамжуулалт
Түр зуурын ба тогтвортой трансфекци нь вирусын бус системээр эукариот эс рүү шилжих генийн үед илэрдэг хоёр төрлийн трансфекци юм. Өөрчлөгдсөн гадаад ДНХ нь түр зуурын трансфекцэд эзэн геномтой нэгддэггүй бол тогтвортой трансфекцияд эзэн геномтой нэгддэг. Дугуй ороомогтой ДНХ нь түр зуурын дамжуулалтыг харуулсан бол шугаман ДНХ тогтвортой дамжуулалтыг илүүд үздэг. Энэ нь түр зуурын болон тогтвортой трансфекция хоёрын ялгаа юм. Гэсэн хэдий ч түр зуурын дамжуулалт нь тогтвортой трансфекциятай харьцуулахад илүү түгээмэл бөгөөд хялбар байдаг. Гэхдээ хоёроос нэгийг нь сонгох нь ген шилжүүлэх зорилго, судалгааны төслийн үргэлжлэх хугацаа зэргээс шалтгаална.
