Гол ялгаа: Цаас ба Нимгэн давхарга ба баганын хроматограф
Цаасны хроматографи, нимгэн давхаргын хроматографи, баганын хроматографи нь гурван төрлийн хроматографийн арга юм. Цаасан хроматографи, нимгэн давхаргын хроматографи ба баганын хроматографийн гол ялгаа нь хроматографийн техникт ашигласан суурин фазын төрлөөс хамаарна. Цаасан хроматографид целлюлозын цаасыг суурин үе болгон, Нимгэн давхаргын хроматографид хөнгөн цагааны исэл эсвэл цахиурын гелийг хөдөлгөөнгүй фаз болгон ашигладаг бол баганын хроматографид тохиромжтой матриц материалаар савласан баганыг хөдөлгөөнгүй фаз болгон ашигладаг.
Уураг, нүүрс ус зэрэг биомолекулуудыг ялгах, тодорхойлох явцад хроматографи нь биофизикийн чухал арга юм. Хроматографи нь нэгдлүүдийг уусах чадвар, хэмжээ, цэнэгээр нь ялгадаг. Салах механизмд үндэслэн хроматографи нь ион солилцох, шингээх, хуваах, хэмжээг хасах зэрэг механизмуудыг ашигладаг бөгөөд хроматографийн гурван арга байдаг; тухайлбал цаас, нимгэн давхарга, баганын хроматограф. Цаасны хроматографи нь нэгдлийн хатуу шингэн шингээлт, уусах чанарт суурилдаг бөгөөд суурин үе болгон целлюлоз цаасыг ашигладаг. Нимгэн давхаргын хроматографи нь молекулуудын хатуу шингэн шингээлт дээр суурилдаг. Энэ нь ихэвчлэн хөнгөн цагааны исэл эсвэл цахиурлаг гелээс бүрдэх хөдөлгөөнгүй фаз ба уусгагч болох хөдөлгөөнт фазтай. Баганын хроматограф нь матрицаар дүүргэсэн баганыг ашигладаг бөгөөд энэ нь молекулуудыг хэмжээ, хамаарал эсвэл цэнэгээс нь хамааруулан ялгахад ашигладаг.
Цаасны хроматограф гэж юу вэ?
Цаасны хроматографи нь хроматографийн хамгийн энгийн төрөл бөгөөд өргөн хүрээний судалгаанд ашигладаггүй. Энэ нь ихэвчлэн оюутны лабораторид холимогт агуулагдах амин хүчил, нүүрс ус зэрэг биомолекулуудыг тодорхойлоход ашиглагддаг. Цаасны хроматограф нь целлюлозын цаас эсвэл ватман шүүлтүүрийн цаас ашиглан хийдэг хөдөлгөөнгүй фаз ба n-бутанол гэх мэт органик уусгагчийг ашиглан бэлтгэдэг хөдөлгөөнт фазыг ашигладаг. Суурин фаз нь усаар ханасан тул суурин фазыг шингэн болгодог. Тиймээс, нэгдлүүдийг ялгаж, нэгдлүүдийн уусах чадвараас хамааран хөдөлгөөнт фазын дэргэд ажиллуулахыг зөвшөөрдөг. Тиймээс хроматограммыг боловсруулахад нэгдэл бүрийн уртыг тодорхойлохын тулд будалт хийж болно. Ингэснээр хадгалах хүчин зүйлийг тооцоолж болно.
Зураг 01: Цаасан хроматограф
Цаасны хроматографийг уусгагчийн чиглэлээс хамаарч өгсөх цаасан хроматографи болон буурах цаасан хроматографи гэж ангилж болно.
Нимгэн давхаргын хроматограф гэж юу вэ?
Нимгэн давхаргын хроматографи буюу TLC нь холимогт агуулагдах өөр өөр амин хүчлийг тодорхойлох эсвэл уураг тодорхойлоход түгээмэл хэрэглэгддэг арга юм. Тусгаарлах арга нь хатуу шингэний шингээлт дээр суурилдаг. Нимгэн давхаргын хроматографийн үед хөнгөн цагааны исэл эсвэл цахиурын гельээр хийсэн хавтанг хөдөлгөөнгүй үе болгон ашигладаг. Уусгагчийн хольц нь шаардлагаас хамааран өөр өөр бөгөөд уусгагчийг бэлтгэхийн тулд n-бутанол, цууны хүчил, ус зэрэг органик нэгдлүүдийн өөр өөр хослолыг ашиглаж болно. Тусгаарлах нэгдлүүдийг хавтан дээр толботой бөгөөд уусгагч хольцонд дүрнэ. Уусгагч нь хавтангийн хялгасан судасны үйлчлэлд үндэслэн дээш хөдөлсний дараа хавтан дээрх толботой нэгдлүүд нь уусгагч дахь уусах чадвараас хамааран хөдөлдөг.
Зураг 02: Нимгэн давхаргын хроматограф
Хроматограмм хийлгэсний дараа толбыг илрүүлэх нь янз бүрийн будах процедурын дагуу хийгддэг. Зарим нь нингидрин будгийг ашигладаг бөгөөд энэ нь нэлээд хортой будах арга юм. Орчин үеийн нимгэн давхаргын хроматограммууд нь гүйлтийн дараа хроматограммыг үзэхийн тулд флюресценцийн аргыг ашигладаг. Түүний туулсан зайнаас хамааран нэгдэл тус бүрийн хадгалах хугацааг тооцоолж болно. Үүнийг ашигласан хольц дээр үндэслэн ялгасан нэгдлийн төрлийг тодорхойлоход ашиглаж болно. TLC нь уургийн холимог дахь амин хүчлийг тодорхойлох, мөн холимогт агуулагдах өөр төрлийн моносахаридыг ялгахад голчлон ашиглагддаг.
Баганын хроматографи гэж юу вэ?
Баганын хроматографи нь баганад суурилсан салгах аргыг ашигладаг олон төрлийн хроматографийн аргыг тодорхойлоход хэрэглэгддэг өргөн нэр томъёо юм. Баганын хроматографийн хувьд нэгдлүүдийг салгахын тулд савлагааны материалтай физик баганыг ашигладаг. Тусгаарлах нь нэгдлүүдийн өөр өөр физик шинж чанарт үндэслэсэн байж болно. Эдгээр шинж чанарууд нь цэнэг, хэмжээ, 3 хэмжээст хэлбэр, холбох чадвар гэх мэт байж болно. Иймээс матрицын материалаар савлагдсан багана нь хөдөлгөөнгүй фазын үүрэг, баганад хэрэглэж буй угаах буфер нь хөдөлгөөнт фазын үүрэг гүйцэтгэдэг.
Хэрэв молекулуудыг хэмжээнээс нь хамааруулан ялгах юм бол баглаа боодлын материалыг нэгдлүүд дамжин өнгөрөх нүх сүв үлдээх байдлаар савлана. Тиймээс нүх сүвээр урсаж чадахгүй том молекулуудыг эхлээд ялгаруулдаг бол жижиг молекулуудыг ялгахад илүү их цаг зарцуулдаг.
Зураг 03: Баганын хроматограф
Хэрэв молекулуудыг цэнэгээр нь салгавал хөдөлгөөнгүй фаз нь цэнэгээрээ нэгдлүүд татагдах анион эсвэл катион солилцогчийг агуулна. Тиймээс угаах үе шатанд холбоогүй нэгдлүүд ялгарна. Элюцийн буферийг нэмэхэд холбогдсон цэнэгтэй нэгдлүүд ялгарна. Эдгээр ялгаруулагчийг илрүүлэх нь ихэвчлэн спектрофотометрийн техникт суурилдаг.
Цаасны нимгэн давхарга ба баганын хроматографийн хооронд ямар төстэй зүйл байдаг вэ?
- Амин хүчил, уураг, нүүрс ус зэрэг биомолекулуудыг ялгахад бүх цаасны нимгэн давхарга ба баганын хроматографийн гурван аргыг ашигладаг.
- Цаасны нимгэн давхарга болон баганын хроматографийн техник нь хөдөлгөөнт фаз ба хөдөлгөөнгүй фазтай.
- Цаасны нимгэн давхарга болон баганын хроматографийн техник нь биофизикийн механизмыг ашиглан тусгаарладаг.
Цаасны нимгэн давхарга ба баганын хроматографийн ялгаа нь юу вэ?
Цаас ба Нимгэн давхарга ба баганын хроматограф |
|
| Цаасан хроматограф | Цаасны хроматографи нь нэгдлийн шингэн-шингэн шингээлт, уусах чадварт үндэслэн нэгдлүүдийг ялгахад ашигладаг хроматографийн арга юм. Энэ нь целлюлоз цаасыг хөдөлгөөнгүй үе болгон ашигладаг. |
| Нимгэн давхаргын хроматографи | Нимгэн давхаргын хроматографи нь молекулуудын хатуу шингэн шингээлт дээр суурилсан хроматографийн өөр нэг арга юм. Энэ нь хөнгөн цагааны исэл эсвэл цахиурлаг гелээс тогтсон хөдөлгөөнгүй фазтай ба хөдөлгөөнт фаз нь уусгагч болох уусгагчтай. |
| баганын хроматографи | Баганын хроматограф нь молекулуудыг хэмжээ, хамаарал эсвэл цэнэгээс нь хамааруулан салгахад ашигладаг матрицаар дүүргэсэн баганыг ашигладаг. |
| Суурин үе шат | |
| Цаасан хроматограф | Ватманы нитроцеллюлозоор хийсэн цаасыг цаасан хроматографийн суурин үе болгон ашигладаг. |
| Нимгэн давхаргын хроматографи | Хөнгөн цагааны исэл эсвэл цахиурлаг гелийг нимгэн давхаргын хроматографийн хөдөлгөөнгүй үе болгон ашигладаг. |
| баганын хроматографи | Тохирох баглаа боодлын материалаар савласан баганыг баганын хроматографийн хөдөлгөөнгүй үе болгон ашигладаг. |
| Мобайл үе шат | |
| Цаасан хроматограф | Ажилдаг уусгагч нь цаасан хроматографийн хөдөлгөөнт үе шат юм. |
| Нимгэн давхаргын хроматографи | Ажилдаг уусгагч нь нимгэн давхаргын хроматографийн хөдөлгөөнт үе шат юм. |
| баганын хроматографи | Угаах буфер нь баганын хроматографийн хөдөлгөөнт үе шат юм. |
| Салгахад ашигласан механизм | |
| Цаасан хроматограф | Цаасны хроматограф нь хатуу шингэн шингээлт дээр суурилдаг. |
| Нимгэн давхаргын хроматографи | Нимгэн давхаргын хроматограф нь хатуу шингэн шингээлт дээр суурилдаг. |
| баганын хроматографи | Баганын хроматограф нь хэмжээ хасалт, цэнэг болон хэлбэрт суурилдаг. |
| Элюцийн буфер | |
| Цаасан хроматограф | Цаасан хроматографид шаардлагагүй. |
| Нимгэн давхаргын хроматографи | Нимгэн давхаргын хроматографид шаардлагагүй. |
| баганын хроматографи | Багананы хроматографид шаардлагатай. |
| Илрүүлэх | |
| Цаасан хроматограф | Будалт ба хадгалах хүчин зүйлийг тодорхойлох замаар. |
| Нимгэн давхаргын хроматографи | Будалт ба хадгалах хүчин зүйлийг тодорхойлох замаар. |
| баганын хроматографи | Спектрофотометрийн тодорхойлолт. |
Хураангуй – Нимгэн цаас ба баганын хроматограф
Цаасны хроматографи, TLC болон баганын хроматографи нь уураг, амин хүчил, нүүрс ус (ихэвчлэн моносахаридууд) зэрэг биомолекулуудыг салгахад ашигладаг салгах арга юм. Цаасны хроматографид целлюлозын цаасыг хөдөлгөөнгүй үе болгон ашигладаг бөгөөд ялгах механизм нь хатуу шингэн шингээлт дээр суурилдаг. TLC нь хатуу шингэн шингээх механизмыг бас ашигладаг. Молекулууд нь хөдөлгөөнт фаз дахь уусах чадвараас хамааран хөдөлгөөнгүй үе шатанд тусгаарлагддаг. Баганын хроматограф нь нэгдлийн хэмжээ, хэлбэр, цэнэг, молекулын жин гэх мэт физик шинж чанаруудыг ялгахад ашигладаг. Матрицын материалаар дүүргэсэн багана нь хөдөлгөөнгүй фазын үүрэг гүйцэтгэдэг бол угаах буфер нь уусгагч фазын үүрэг гүйцэтгэдэг. Энэ бол нимгэн цаасан давхарга болон баганын хроматографийн хоорондох ялгаа юм.
