GFP болон EGFP-ийн гол ялгаа нь GFP нь хөхтөн амьтдын эсийг молекул клончлоход агуулагддаг зэрлэг төрлийн уураг бөгөөд EGFP нь хөхтөн амьтдын эсэд ашиглаж болох сайжруулсан эсвэл боловсруулсан GFP төрөл юм..
Молекулын клонжуулалт нь эрдэмтэд рекомбинант технологиор уургийг илэрхийлэхэд асар их ашигладаг дэвшилтэт арга юм. Рекомбинант ДНХ технологийн хувьд рекомбинант векторыг эзэн организмд амжилттай хувиргах шаардлагатай. Тиймээс хувиргах явцад тухайн сонирхсон ген нь эзэнд хувирсан эсэхийг тодорхойлж, баталгаажуулах ёстой. Үүнийг үнэлэхийн тулд молекул биологичид хэд хэдэн аргыг ашигладаг. Эдгээр аргуудын нэг нь сурвалжлагч ген юм. Эдгээр сурвалжлагч генүүд нь зөв хувиргагчийг сонгоход сонгогдох маркерын үүрэг гүйцэтгэдэг. Тиймээс Ногоон Флюресцент уураг (GFP) болон Сайжруулсан ногоон Флюресцент уураг (EGFP) нь молекул клончлоход хэрэглэгддэг хоёр сурвалжлагч уураг юм.
GFP гэж юу вэ?
GFP нь бусад флюресцент уургуудаас ялгарах 238 амин хүчлийн үлдэгдэл, амин хүчлийн дарааллын хэд хэдэн сонгогдох хэсгийг агуулсан зэрлэг төрлийн уураг юм. Цаашилбал, энэ зэрлэг төрлийн уураг нь анх Aequorea Victoria-аас тусгаарлагдсан байсан; медузын нэг төрөл. Гэсэн хэдий ч байгалийн үзэгдлийн үед медуз нь тодорхой өдөөлтөд хариу үйлдэл үзүүлэхийн тулд ногоон өнгийн флюресцент үүсгэж чаддаг байв.
Өмнө нь энэ үзэл баримтлал нь эрдэмтдийг гайхшруулж байсан бөгөөд тэд үүнийг өөрсдийн рекомбинант ДНХ технологид ашиглахаар шийджээ. Иймээс эрдэмтэд зэрлэг төрлийн генийн энэхүү мутант хэлбэрийг генийн экспрессийн судалгаандаа сурвалжлагч ген болгон ашигласан. GFP-ийн зэрлэг төрлийн ген нь өрөөний температур эсвэл хэт ягаан туяаны гэрэлд флюресцент үүсгэдэг уураг үйлдвэрлэх чадвартай. Тиймээс трансформаторт оруулахдаа флюресценцийг илэрхийлж, үүсгэдэг. Хэрэв хувиргах процессын дараа флюресцент үүсвэл энэ нь хувиргах процессын амжилтыг баталгаажуулна. Энгийн үгээр хэлбэл, флюресценцийн ялгарал нь сонирхлын генийг хост руу зөөвөрлөх вектор амжилттай хувирч байгааг илтгэнэ.
Зураг 01: GFP
Энэ шалтгааны улмаас GFP нь генийн илэрхийлэлийн in vivo маркерын үүрэг гүйцэтгэдэг. Одоогийн байдлаар генийн инженерчлэлийн техникийг GFP үйлдвэрлэхэд ашиглаж байна. Мөн EGFP гэх мэт GFP-ийн олон сайжруулсан хувилбарууд байдаг. Тиймээс энэ нь молекул клончлол болон генийн экспрессийн судалгаанд GFP-ийг үр ашигтай ашиглах боломжийг олгодог.
EGFP гэж юу вэ?
Сайжруулсан ногоон флюресцент уураг буюу EGFP нь GFP-ийн сайжруулсан хувилбар юм. Энгийнээр хэлбэл, бид EGFP-ийг зэрлэг төрлийн GFP-ийн боловсруулсан хувилбар гэж тодорхойлж болно. GFP-ийн зэрлэг төрлийн ген мутацид орох үед энэ нь ашигтай нөлөө үзүүлдэг. Тиймээс, GFP-ийн мутацид орсон ген нь шинэ тэмдэгтүүдийг илэрхийлэх боломжийг олгодог бөгөөд үүний үр дүнд бид сайжруулсан шинж чанартай Enhanced GFP-ийг гаргаж чадна. Цаашилбал, бид цацраг туяа эсвэл химийн аргыг ашиглан зэрлэг төрлийн GFP генийн мутацийг амжилттай нэвтрүүлж чадна. Эдгээр мутацид орсон генүүд нь илүү ашигтай шинж чанартай EGFP-ийг үүсгэдэг.
Зураг 02: EGFP
EGFP-ийн сайжруулсан шинж чанарууд нь дараах байдалтай байна;
- Илүү хүчтэй флюресценцийн дохиог гаргах чадвартай.
- Мэдрэмж өндөртэй.
- Үүнийг прокариот болон бусад доод түвшний эукариотуудын оронд хөхтөн амьтдын эсэд хэрэглэж болно.
- Мөн бүтээгдэхүүний цэвэршилтийг нэмэгдүүлнэ.
Тиймээс GFP-тэй харьцуулахад EGFP нь генийн экспрессийн судалгаанд илүү тохиромжтой сонголт юм. Гэсэн хэдий ч, бүтээгдэхүүн нь GFP-тэй харьцуулахад илүү үнэтэй.
GFP болон EGFP хоёрын ижил төстэй зүйл юу вэ?
- GFP болон EGFP нь ногоон өнгө ялгаруулах чадвартай хоёр уураг юм
- Тиймээс хоёулаа генийн экспрессийн судалгаанд сурвалжлагч уургийн үүрэг гүйцэтгэдэг.
- Мөн рекомбинант ДНХ технологийг ашиглан хоёуланг нь нэгтгэх боломжтой.
- Түүгээр ч барахгүй, сайжруулсан хэлбэрийг нэгтгэхийн тулд эдгээр хоёр төрлийг цаашид мутаци хийхэд хялбар байдаг.
GFP болон EGFP хоёрын ялгаа юу вэ?
Сурвалжлагч ген нь рекомбинант ДНХ-ийн технологийг сонирхож буй гентэй холбогддог ген юм. Энэ нь рекомбинант векторыг хост руу амжилттай хувиргаж байгааг илтгэнэ. Энд GFP болон EGFP нь сурвалжлагч уургийн үүрэг гүйцэтгэдэг хоёр төрлийн ногоон цэцэглэдэг уураг юм. Гэсэн хэдий ч, GFP ба EGFP-ийн гол ялгаа нь GFP нь зэрлэг, EGFP нь GFP-ийн инженерчлэгдсэн хувилбар юм. Цаашилбал, EGFP нь GFP-ээс илүү ашигтай шинж чанартай байдаг. Жишээлбэл, EGFP нь илүү хүчтэй флюресцент гэрлийг үүсгэдэг бөгөөд GFP-ээс илүү мэдрэмтгий байдаг. GFP болон EGFP хоёрын өөр нэг ялгаа нь бидний ашиглаж болох системүүд юм. Хөхтөн амьтдын системүүд GFP ашигладаг бол хөхтөн амьтдын системүүд EGFP ашигладаг.
Доорх инфографик нь GFP болон EGFP-ийн ялгааг хүснэгт хэлбэрээр харуулж байна.
Хураангуй – GFP ба EGFP
GFP болон EGFP нь молекулын клончлол болон генийн экспрессийн судалгааны сурвалжлагч уураг юм. GFP нь ногоон флюресцент уураг болох зэрлэг төрлийн уураг юм. Уг уураг нь анх Aequorea victoria медузаас тусгаарлагдсан байв. Үүний эсрэгээр, EFGP нь GFP уургийн сайжруулсан хэлбэр юм. Энэ нь сайжруулсан шинж чанар бүхий зэрлэг төрлийн мутант юм. Тиймээс EFGP нь илүү өндөр дохионы хүч, өндөр мэдрэмжтэй байдаг. Тиймээс бид үүнийг хөхтөн амьтдын вектор дээр ашиглаж болно. Үүний эсрэгээр, GFP-ийг зөвхөн хөхтөн амьтдын бус векторуудад ашигладаг. Ерөнхийдөө энэ нь GFP болон EGFP хоёрын ялгаа юм.
