Клон дараалалаар клон хийх ба бууны бууны дараалал хоёрын гол ялгаа нь тэдний үйл ажиллагааны аргад оршдог. Клон дараалал тогтоох арга нь хромосомын зураглалыг хийж, дараалал тогтоохын өмнө клончлохыг хамардаг бол бууны дарааллаар клон хийх нь дарааллын явцад хромосомын зураглал болон клончлох алхмуудыг хоёуланг нь орхигдуулдаг.
Клон дараалалаар клон хийх, бууны дараалал тогтоох замаар клон хийх нь орчин үеийн геномын дараалал тогтоох хоёр арга юм. Клон дараалалаар клон хийх нь дарааллын илүү найдвартай арга юм. Гэсэн хэдий ч бууны дарааллаар клон хийх арга нь илүү хурдан бөгөөд хямд байдаг. Уг нийтлэлд клон дараалал ба бууны бууны дараалал хоёрын нарийн ялгааг онцолсон болно.
Clone Sequencing by Clone гэж юу вэ?
Клон дараалалаар клон хийх нь геномын дараалал тогтоох арга юм. Энэ нь ДНХ хуваагдахаас өмнө хромосом бүрийн зураглалыг шаарддаг. Зураглал хийсний дараа ДНХ-ийг 150 килобазын урттай хэсгүүдэд хуваах ёстой. Дараа нь эдгээр хэсгүүд дараалалд бэлэн болно. Дараагийн алхам бол ДНХ-ийн хэсгүүдийг бактерийн хиймэл хромосом (BACs), дараа нь бактерийн эсүүдэд оруулах явдал юм. Хэсэг хэсгүүд нь одоо бактерийн эс дотор байгаа тул бактери хуваагдах бүрт оруулсан ДНХ-ийн хэлтэрхийнүүд мөн хуваагдан ижил төстэй олон хуулбарыг үүсгэдэг. Дараа нь бие даасан бактерийн клон ДНХ-ийг 500 үндсэн хос урт фрагмент болгон хуваана. Эдгээр нь жижиг хэсгүүд бөгөөд давхардсан хэсгүүд юм. Дараа нь эдгээр хэлтэрхийнүүд нь мэдэгдэж буй ДНХ-ийн дараалал бүхий вектор руу оруулснаар дараалал явагдана. Векторын мэдэгдэж буй дарааллаас эхлэн дараалал нь үл мэдэгдэх дараалал хүртэл үргэлжилнэ.
Дараалалыг дуусгасны дараа давхцаж буй дарааллын хэсгүүдийг тодорхойлох шаардлагатай. Үүний дараа хэсгүүдийг нэгтгэх нь BAC-д анх үзүүлсэн том хэсгүүдийг үүсгэх явдал юм. Дараа нь геномын зургийн дагуу хромосом руу том хэсгүүдийн нэгдэл явагдана.
Зураг 01: Клон дараалалаар хувилах
Клон дарааллаар клон хийх чухал давуу тал нь урьдчилан бэлтгэсэн геномын зураглал нь том хэсгүүдийг найдвартай цуглуулахад тусалдаг. Гэхдээ энэ дарааллын аргын сул тал нь геномын зураглал үүсгэх, клон хийхэд цаг хугацаа их шаарддаг явдал юм. Гэхдээ "Хүний геномын төсөл"-ийн үед энэ аргыг илүүд үзсэн.
Буудлагын дараалалаар клон хийх гэж юу вэ?
Бууны дараалалаар клон хийх нь ДНХ-ийн дарааллыг санамсаргүй байдлаар олон жижиг хэлтэрхий болгон задалж, давхцаж буй хэсгүүдийг ажиглан дарааллыг дахин нэгтгэдэг дарааллын арга юм. Том хөхтөн амьтдын геномыг дараалалд хуваах, цуглуулахад хэцүү байдаг. Энэ нь тэдний бүтцийн нарийн төвөгтэй байдал, хэмжээстэй холбоотой юм. Хэдийгээр клон дарааллын аргаар клон хийх нь найдвартай боловч нарийн төвөгтэй организмын геномыг дараалалд оруулахад удаан хугацаа шаардагддаг. Тиймээс бууны дараалалаар клон хийх нь илүү хурдан гүйцэтгэх найдвартай, хямд дарааллын арга болжээ. Тиймээс орчин үеийн эрдэмтэд нарийн төвөгтэй геномтой тэмцэхийн тулд энэ дарааллын аргад тулгуурладаг.
Зураг 02: Бууны дараалалаар хувилах
Бууны дарааллын аргаар клонжуулах явцад ердийн геномын зураглал болон клончлох алхамууд хийгддэггүй. Эхэндээ геном бүхэлдээ 20 килобазаас 300 килобаз хүртэл янз бүрийн хэмжээтэй хуваагддаг. Дараа нь дараалал хийгдэнэ. Дараа нь нарийн төвөгтэй компьютерийн программ хангамжийг ашиглан давхцаж буй бүс нутгийг хараад хэсгүүдийг угсрах шаардлагатай.
Буудлагын дараалалаар клон хийх нь одоо байгаа геномын дарааллын нарийвчлалыг сайжруулахад тусалдаг. Энэ аргын гол давуу тал нь клон дарааллын аргаар клон хийхээс хамаагүй хурдан бөгөөд зардал багатай байдаг. Гэсэн хэдий ч энэ үйл явц нь генетикийн газрын зургийг ашиглахгүй. Тиймээс угсралтын явцад алдаа гарах магадлал өндөр байдаг. Тиймээс энэ нь бууны дарааллын аргын тусламжтайгаар клон хийх гол сул тал юм.
Clone sequencing by Clone and Shotgun Sequencing хоёрын ижил төстэй талууд юу вэ?
- Клон дараалал, бууны дараалал хоёр нь геномын дараалал тогтоох хоёр арга юм.
- Дараалсан хоёр аргын үед эвдэрсэн хэсгүүдийн угсралт нь давхцсан бүс нутгийг тодорхойлох замаар явагдана.
- Мөн ДНХ-ийг жижиг хэсгүүдэд задлах нь клон болон бууны дараалалд зайлшгүй шаардлагатай.
Clone Sequencing болон Shotgun Sequencing-ээр клон хийх нь юугаараа ялгаатай вэ?
Клон дарааллын техникээр клон хийх нь хромосомын зураглал ба клончлол гэсэн хоёр үндсэн үе шатыг агуулдаг. Үүний эсрэгээр, бууны дараалалаар клон хийх нь эдгээр хоёр алхамыг дагаж мөрддөггүй; энэ нь санамсаргүй байдлаар ДНХ-ийн дарааллыг олон жижиг хэсгүүдэд хувааж, давхцаж буй бүс нутгийг ажиглан дарааллыг дахин нэгтгэдэг. Тиймээс энэ нь клон дараалал ба бууны бууны дараалал хоёрын гол ялгаа юм. Энэ хүчин зүйлээс шалтгаалан клон дарааллаар клон хийх нь үнэтэй бөгөөд цаг хугацаа шаардсан үйл явц бөгөөд бууны дараалалаар клон хийх нь илүү хурдан бөгөөд хямд байдаг.
Гэсэн хэдий ч угсралтын явцад гарах алдаа нь клон дарааллаар клон хийх явцад гарах магадлал бага байдаг. Тиймээс найдвартай байдал өндөр байна. Гэсэн хэдий ч бууны дараалалаар клон хийх нь харьцангуй найдвартай арга биш юм. Тэгэхээр энэ нь клон дараалал болон бууны бууны дараалал хоёрын хооронд мэдэгдэхүйц ялгаа юм.
Доорх мэдээллийн графикт клон дараалал ба бууны бууны дараалал хоёрын ялгааны талаарх дэлгэрэнгүй мэдээллийг харуулав.
Товч мэдээлэл – Хувиарлах дараалал ба бууны бууны дараалал
Клон дараалал, бууны бууны дараалал хоёрын ялгааг нэгтгэн дүгнэхэд клон дараалал ба бууны бууны дараалал нь геномын дараалал тогтоох хоёр арга юм. Гэсэн хэдий ч клон дарааллын техникээр клон хийх нь геномын зураглал, клончлох үйл явцыг хоёуланг нь хамардаг бол бууны дарааллын аргаар клондуулдаггүй. Тиймээс энэ нь клон дараалал ба бууны бууны дараалал хоёрын гол ялгаа юм. Геномын зураглал нь клон дараалалаар клон хийх явцад явагддаг тул дарааллыг угсрах явцад алдаа гарах магадлал бага байдаг. Гэхдээ бууны дарааллаар клон хийх нь илүү хурдан бөгөөд хямд үйл явц юм. Гэсэн хэдий ч энэ нь харьцангуй бага найдвартай юм. "Хүний геномын төсөл"-ийн үед клон дараалал тогтоох замаар клон хийх нь илүүд үздэг дарааллын арга байсан. Гэсэн хэдий ч орчин үеийн молекул биологичид бууны дараалал тогтоох замаар клонд илүү найддаг.
