BL21 болон DH5 Alpha-ийн гол ялгаа нь BL21 нь уураг илэрхийлэхэд ашиглагддаг протеазын дутагдалтай генийн инженерчлэлийн чадвартай E. coli эс бөгөөд DH5 Alpha нь генийн инженерчлэлийн чадвартай, recA1 мутацитай E. coli эс юм. плазмидын хувиргалт.
Э. coli нь рекомбинант уургийн үйлдвэрлэлд хамгийн алдартай организмуудын нэг юм. Энэ нь олон жилийн туршид хамгийн алдартай илэрхийллийн платформ болсон. Үүнийг мөн эсийн үйлдвэр болгон ашигладаг. BL21 ба DH5 Alpha нь одоогоор уургийн илэрхийлэл болон плазмидын хувиргалтанд ашиглагдаж байгаа генийн инженерчлэгдсэн хоёр коли эс юм.
BL21 гэж юу вэ?
BL21 нь протеазын дутагдалтай генийн инженерчлэлийн чадвартай E.coli эс юм. E. coli BL21 нь В омогоос гаралтай бактерийн эс юм. Энэ нь Лон протеаз ба ompT гадна мембраны протеазын согогтой. Энэ нь ихэвчлэн илэрхийлэгдсэн уургийн тогтвортой байдлыг авчирдаг тул рекомбинант уургийн илэрхийлэлд ихэвчлэн ашиглагддаг. BL21 нь pCold I-IV ДНХ болон pCold TF ДНХ-тай уураг илэрхийлэхэд тустай. Гэхдээ энэ чадварлаг E. coli эс нь pET систем гэх мэт T7 дэмжигчийг ашиглан уураг илэрхийлэх системд зориулагдаагүй болно. Үүний шалтгаан нь BL21 нь T7 РНХ полимеразыг илэрхийлдэггүй. Нэмж дурдахад, плазмид нь рекА мутацигүй тул түүнийг бүтээх, бэлтгэхэд ашиглахыг зөвлөдөггүй.
Зураг 01: BL21
BL21-ийг анх Studier 1986 онд B шугамын янз бүрийн өөрчлөлтийн дараа тайлбарласан. BL21 эсүүд нь LON протеазын дутагдалтай байдаг бөгөөд энэ нь гадны олон уургийг задалдаг. Цаашилбал, гаднах мембраны протеазыг (OmpT) кодлодог өөр нэг ген дутагдаж байгаа бөгөөд энэ нь эсийн гаднах уургийг задлах үүрэгтэй. Эдгээр уургийн дутагдал нь E. coli BL21 эсүүдэд гадны уураг амжилттай үйлдвэрлэхэд хүргэдэг. Цаашилбал, эдгээр эсүүд дэх hsdSB мутаци нь гадны ДНХ-ийн метилизаци болон BL21 эсийг тасалдуулахаас сэргийлдэг.
DH5 Альфа гэж юу вэ?
DH5 Alpha нь генийн инженерчлэгдсэн чадварлаг E. coli эс бөгөөд recA1 мутацитай бөгөөд үндсэндээ плазмидыг хувиргахад ашигладаг. DH5 Alpha E. coli эсийг Америкийн биологич Дуглас Ханахан генийн инженерчлэлийн аргаар хувиргах үр ашгийг нэмэгдүүлэх зорилгоор бүтээжээ. DH5 Альфа эс нь гурван өөр мутацитай: recA1, endA1, lacZΔM15. recA1 нь глицин 160 болон recA полипептид дэх аспарагины хүчлийн үлдэгдлийг сольдог нэг цэгийн мутаци юм. Энэ мутаци нь рекомбиназуудын идэвхийг бууруулж, гомолог рекомбинацийг идэвхгүй болгодог. endA1 мутаци нь эсийн доторх эндонуклеазыг идэвхгүй болгож, түүнийг оруулсан плазмидыг задлахаас сэргийлдэг.
Зураг 02: DH5 Альфа
Түүгээр ч зогсохгүй lacZΔM15 мутаци нь өөрчлөгдсөн эсийг хөх-цагаан скрининг хийх боломжийг олгодог. Эдгээр эсүүд нь чадварлаг эсүүд юм. Тэдгээрийг ихэвчлэн кальцийн хлоридын хувиргалтаар хүссэн плазмидыг оруулахад ашигладаг. Ханахан аргатай DH5 Альфа эс нь плазмидыг хувиргахад хамгийн үр дүнтэй чадварлаг эс болохыг сүүлийн үеийн судалгаагаар тогтоосон.
BL21 болон DH5 Альфа хоёрын ижил төстэй зүйл юу вэ?
- BL21 ба DH5 Alpha нь генийн инженерчлэлийн аргаар боловсруулсан хоёр E.coli
- Хоёулаа чадварлаг эсүүд.
- Тэд өөр мутациас тогтдог.
- Хоёулаа байгалийн амьдрах орчингүй.
- Эдгээрийг экспрессийн судалгаа, клончлох процедур зэрэг лабораторийн зорилгоор ашигладаг.
BL21 болон DH5 Альфа хоёрын ялгаа юу вэ?
BL21 нь протеазын дутагдалтай генийн инженерчлэлийн чадвартай E. coli эс юм. Нөгөөтэйгүүр, DH5 Alpha нь генийн инженерчлэгдсэн чадварлаг E. coli эс бөгөөд recA1 мутацитай голчлон плазмидыг хувиргахад ашигладаг. Энэ бол BL21 ба DH5 Alpha хоёрын гол ялгаа юм. Цаашилбал, BL21 E. coli эсэд recA1 мутаци байхгүй бол DH5 Alpha E. coli эсэд recA1 мутаци байдаг.
Дараах инфографик нь BL21 болон DH5 Alpha-ийн ялгааг хүснэгт хэлбэрээр жагсаасан болно.
Хураангуй – BL21 ба DH5 Alpha
Э.коли-ийн эмгэг төрүүлэгч бус омгуудыг эрдэмтэд лабораторийн экспрессийн судалгаа, клончлох зорилгоор генетикийн хувьд боловсруулсан. BL21 ба DH5 Alpha нь генийн инженерчлэлийн аргаар боловсруулсан хоёр коли эс юм. BL21 нь уургийн экспрессийн судалгаанд голчлон ашиглагддаг. Нөгөө талаас, DH5 Alpha нь үндсэндээ плазмидыг хувиргах зорилгоор ашиглагддаг. Тиймээс энэ нь BL21 болон DH5 Альфагийн ялгааны хураангуй юм.
